基因改造非β細(xì)胞治療Ⅰ型糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Ⅰ型糖尿病是世界范圍內(nèi)以高血糖和酮癥酸中毒等表現(xiàn)為特點(diǎn)的常見代謝性疾病.的20年來中國(guó)糖尿病的發(fā)并率呈上升趨勢(shì),已成為繼惡性腫瘤和心腦血管疾患第三位重要的慢性非傳染性疾病.因自身免疫反應(yīng)破壞胰島素的β細(xì)胞,患者多于青春期發(fā)病和依賴胰島素的替代治療,雖然這種治療方法能使病人恢復(fù)相對(duì)正常的生活,但仍存在不足之處并影響患者的生存質(zhì)量.胰島紗基因在非β細(xì)胞中表達(dá)成熟胰島素的研究.目的是為了研究在非β細(xì)胞中表達(dá)成熟胰島素,探索替代胰島素注射或胰島

2、移植治療Ⅰ型糖尿病的方法.采用重疊區(qū)擴(kuò)增基因拼接法（gene splicing by overlap extention,gene SOEing）自胰島素原基因組基因中擴(kuò)增胰島素原的cDNA,并于C肽的兩端引入蛋白酶furin的識(shí)別和切割位點(diǎn)Arg-Xaa-Lys/Arg-Arg,將獲得的突變體重組表達(dá)載體PcDNA3.1/C,通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的Hela,293,和LO2細(xì)胞,G418篩選陽性克隆.同時(shí)用放射免疫、免疫熒光和高壓

3、液相色譜（HPLC）的方法監(jiān)測(cè)細(xì)胞同外胰島素的表達(dá)水平.強(qiáng)力霉素可調(diào)控性的人工β細(xì)胞株的建立.人工β細(xì)胞株能為Ⅰ型糖尿病的治療提供豐富的細(xì)胞來源,但在生理情況下胰島素的分泌需受到嚴(yán)格的調(diào)控.四環(huán)素表達(dá)系統(tǒng)是一種"基因開關(guān)",可以通過加入外源性刺激物,如強(qiáng)力霉素（Dox）來誘導(dǎo)基因的表達(dá).生理反應(yīng)性人工β細(xì)胞株的建立.磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）是肝臟糖異生重要的限速酶,為利用PEPCK啟動(dòng)子在大鼠肝腫瘤細(xì)胞株中重建胰島素的調(diào)節(jié)性