基于乙肝核心抗原的治療性疫苗研究.pdf

1、乙型肝炎感染是世界特別是我國最重要的公國衛(wèi)生問題之一，嚴重的威脅著人們的健康。對于乙型肝炎的慢性感染尚無令人滿意的治療措施。大量證據證明，HBV特異性的細胞免疫反應在HBV清除過程中起了關鍵性的作用。因此我們假設，如果我們可以激起機體的HBV特異性免疫反應，就可以有助于病毒的清除以及病人的康復。炭疽毒素致死因子N末端(LFn)具有將與其融合的抗原投遞之MHC Ⅰ類和MHC Ⅱ類途徑中的功能，并繼而激發(fā)起特異性免疫反應的功能。我們利用這一

2、特性，將HBcAg與LFn融合，研究該融合蛋白是否能激起針對HBcAg特異性免疫反應。 本論文構建表達并純了LFn與HBcAg的融合蛋白，并在尾部加入一個本實驗室前期發(fā)現(xiàn)的一個可以被中國恒河猴限制的表位GDLEITTHSF。 使用LFcE蛋白并配合不同佐劑免疫Balb/c小鼠，實驗結果表明LFcE與PCPP佐劑相互配合可以激發(fā)HBcAg特異性的細胞免疫反應。 認為曾所加表位可能被MamuB*40或者MamuB*6

3、7基因型的MHC分子所限制，因此使用PCR-SSP方法對200余只中國恒河猴進行了Mamu基因分型。得到6只具有MamuB*40基因型的中國恒河猴、15只具有MamuB*67基因型的中國恒河猴，其中3只同時具有上述兩種基因型。 使用PCPP佐劑配合LFcE免疫選定的恒河猴。發(fā)現(xiàn)所有結果有效的實驗組恒河猴均對LFcE蛋白產生應答。而所有恒河猴都不能對新加入的表位GDLEITTHSF產生應答。另外，發(fā)現(xiàn)了兩個表位。其中，GELMTL

4、ATW曾經被報道可以被印度恒河猴所限制，而SFLPSDFFPSI是新發(fā)現(xiàn)的表位。我們也發(fā)現(xiàn)這對于兩個表位的免疫應答具有完全不同的動力學曲線。 使用測序的方法對3只恒河猴進行了Mamu基因分型，發(fā)現(xiàn)這三只中國恒河猴的Mamu基因與印度恒河猴Mamu基因差別較大。在分到20個型中，發(fā)現(xiàn)了4個新的基因型，以及12個新基因亞型。分析后我們認為SFLPSDFFPSI極有可能被MamuA1*2803所限制，但也不排除被MamuB*68的兩個