祛毒湯對ANLL-CR患者BMNC來源DC誘導作用研究.pdf

1、目的：本實驗以體外培養(yǎng)的方法，將達到完全緩解標準的急性髓細胞白血病患者骨髓中分離出去T細胞的骨髓單個核細胞（TD—BMNC）與祛毒湯含藥血清共同培養(yǎng)，觀察含藥血清對此來源的樹突狀細胞（DC）分化成熟的影響。用此法誘導分化的樹突狀細胞（DC）與純化的正常人和緩解期患者外周血T細胞共同培養(yǎng)，得到激發(fā)T細胞，用激發(fā)的T細胞與白血病細胞株（K562）共同培育，以MTT法測定該T細胞對K562細胞株的殺傷活性，探討祛毒湯對急性髓細胞白血病完全緩解

2、期患者DC的免疫功能的影響。 方法： 第一、應用綿羊紅細胞玫瑰花結程序從ANLL—CR患者骨髓中分離出去T細胞的骨髓單個核細胞（TD—BMNC），用含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整TD—BMNC細胞濃度后加入24孔板中培養(yǎng)，培養(yǎng)9d，隔日換液1次，以不同濃度中藥含藥血清、中藥含藥血清聯(lián)合細胞因子（GM—CSF、IL—4、TNF—α）、細胞因子、空白血清組分別培養(yǎng)。 第二、在培養(yǎng)過程中觀察細胞的形態(tài)，并拍

3、照。 第三、用FITC標記的CD—1a、HLA—DR和CD86抗體標記各組細胞，用流式細胞儀檢測各組的DC表面標志CD—1a、HLA—DR和CD86分子的表達率。 第四、分別收集純化的同種異體T細胞、ANLL—CR患者自體T細胞，與AMLCR患者TD—MNC來源的DC以10：1比例加入24孔培養(yǎng)板培養(yǎng)5d，培養(yǎng)基中加入100U/ml的IL—2進行同種異體T細胞及自體T細胞的激發(fā)。 第五、激發(fā)后的各組T細胞與K56

4、2細胞分別以10：1、20：1、40：1效：靶比例培養(yǎng)24h，MTT法檢測不同條件培養(yǎng)的DC誘導T細胞的殺傷效應。 結果： 1.用倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)祛毒湯含藥血清組、含藥血清聯(lián)合細胞因子組、細胞因子組DC的形態(tài)無差別。 2.祛毒湯各劑量組，細胞因子聯(lián)合祛毒湯各劑量組，細胞因子組與空白血清組誘導DC的CD—1a、CD86、HLA—DR的表達比較有顯著差異（P<0.01），均優(yōu)于空白血清組；祛毒湯低劑量組、祛毒湯中劑

5、量組與細胞因子組誘導DC的CD—1a表達有差異（P<0.05），祛毒湯高劑量組、細胞因子聯(lián)合祛毒湯低、中劑量組與細胞因子組CD—1a的表達有顯著差異（P<0.01）；細胞因子聯(lián)合祛毒湯高劑量組與祛毒湯高劑量組CD—1a有差異（P<0.05）；細胞因子聯(lián)合祛毒湯高劑量組與細胞因子聯(lián)合祛毒湯低、中劑量組誘導DC的CD—1a有差異（P<0.05）。祛毒湯高組與細胞因子組誘導DC的CD86表達差異（P<0.05）；祛毒湯高劑量組與祛毒湯低劑量組

6、誘導DC的CD86的表達有差異（P<0.05）。祛毒湯低、中、高劑量組和細胞因子聯(lián)合祛毒湯低、中組誘導DC的HLA—DR的表達與細胞因子組誘導DC的HLA—DR的表達有顯著差異（P<0.01），細胞因子聯(lián)合祛毒湯中劑量組與祛毒湯中劑量組有顯著差異（P<0.01）；細胞因子聯(lián)合祛毒湯高劑量組與祛毒湯高劑量組有顯著差異（P<0.01）。 3.各組激活T細胞對K562細胞均有殺傷作用，各組別與空白血清（KB）組殺傷率均有顯著差異（P<

7、0.01），各組別均優(yōu)于空白血清組。各組內(nèi)比較：正常人T細胞祛毒湯中劑量組40：1與10：1效靶比殺傷率有顯著差異（P<0.01），余各組無差異，正常人T細胞祛毒湯中劑量組20：1與10：1效靶比有差異（P<0.05）；正常人T細胞祛毒湯中劑量聯(lián)合細胞因子組10：1與40：1效靶比有差異（P<0.05），正常人T細胞祛毒湯中劑量聯(lián)合細胞因子組20：1與40：1效靶比有差異（P<0.05），余各組之間效靶比無差異。患者T細胞祛毒湯中低劑量