擬老年癡呆大鼠模型嗅覺系統(tǒng)相關改變的研究.pdf

1、阿爾滋海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種原發(fā)退行性老年癡呆，其特征性病理改變有：腦組織內(nèi)出現(xiàn)大量老年斑(senile placques，SP)、神經(jīng)纖維纏結(neurofibrillary tangle，NFT)、神經(jīng)元數(shù)量減少和顆?？张葑冃?granulovacuolar degeneration，GVD)等，AD的發(fā)病機理十分復雜，可能是多病因相互作用的結果。一些研究發(fā)現(xiàn)，嗅覺系統(tǒng)的功能障礙與AD尤其是早期A

2、D的發(fā)生有著密切的聯(lián)系。為了觀察AD嗅覺系統(tǒng)的病理改變在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，建立一種理想的AD模型十分重要。本實驗通過對大鼠進行腦立體定位將Aβ通過微量進樣器注入大鼠側腦室，導致大鼠被動回避反射及水迷宮學習記憶障礙從而建立AD模型。通過HE染色觀察嗅上皮(olfactory epithelium，OE)、嗅球(olfactorybulb，OB)和海馬組織切片，觀察到AD模型組大鼠的嗅粘膜、嗅球和海馬較對照組均表現(xiàn)有神經(jīng)病理改變。

3、 在成功建立模型的基礎上對模型組和對照組大鼠的嗅粘膜、嗅球和海馬等嗅覺區(qū)域進行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron—specific enolase，NSE)以及嗅覺標記蛋白(olfactory marker protein，OMP)的免疫組化相關檢測，并利用t檢驗方法分析對照組和模型組之間的統(tǒng)計學意義。 為了深入研究基因水平上的變化本

4、文采用DNA微列陣技術對模型大鼠嗅球組織的基因表達譜的變化進行了分析，以期從基因水平上分析嗅覺與老年癡呆的聯(lián)系。在得到的811個差異表達基因中進行第一步初篩，挑選出23個表達差異明顯的基因，這些基因包括與神經(jīng)退行性疾病發(fā)病機制、細胞凋亡途徑、鈣離子信號通路等相關的基因。因為老年癡呆疾病的病因雖然到目前為止并沒有明確，但是主要的分子生物學改變與細胞的凋亡、過氧化以及離子信號通路的改變均有密切的關系，這些在嗅球組織中發(fā)現(xiàn)的差異基因初步說明了

5、嗅球和老年癡呆之間存在一定的聯(lián)系。 本文進一步在所有挑選的差異表達基因中選擇六個與神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的改變、嗅覺特異性標記、細胞凋亡以及鈣離子信號通路的調(diào)控相關的基因進行半定量PCR檢測以驗證轉(zhuǎn)錄水平的變化。另外，在此基礎上采用WesternBlot的方法對這六個差異基因所對應編碼的蛋白即GFAP、NSE、OMP、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN)和蛋白激酶C(proteinkinase C，PKC)進一步驗證蛋