Trihydrophobin 1相互作用蛋白以及Trihydrophobin 1與乳腺癌細胞化療藥物敏感性之間關系的研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文Trihydrophobin 1相互作用蛋白以及Trihydrophobin 1與乳腺癌細胞化療藥物敏感性之間關系的研究姓名：楊延鐘申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：顧建新20070401復旦大學2 0 0 7 屆博士畢業(yè)論文第一部分人類乳頭瘤病毒E 6 相關蛋f l ( E 6 ．A P ) 介導T r i h y d r o p h o b i n1 的泛素．蛋白酶體降解摘要入類乳頭瘤病毒E

2、6 相關蛋白E 6 - A P 是泛素連接酶的一種，它能夠介導細胞內(nèi)一系列蛋白質(zhì)的泛素化降解。我們的研究發(fā)現(xiàn)T H l ，作為一個負性轉(zhuǎn)錄延長調(diào)節(jié)因子復合體( N E L Fc o m p l e x ) 中必不可少的組分之一，能夠與E 6 - A P 相互作用，并且可以作為F A ．A P 調(diào)節(jié)的泛素化降解的新的底物。研究發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)過表達E 6 - A F 可以產(chǎn)生表達劑量依賴的T H I 蛋白水平的降低，同時采用R N A 干擾技

3、術，降低細胞內(nèi)源性E 6 - A P 的表達能夠增加細胞內(nèi)T i l l 的蛋白水平。與對照組比較，過表達E 6 - A P 的細胞株中T H l 蛋白降解加快同時半衰期明顯縮短。野生型的E 6 - A P 可以明顯的促進T H l 蛋白的泛素化降解，而E 6 ．A P 蛋白H E C T 結(jié)構(gòu)域點突變產(chǎn)生的泛素連接酶活性缺失的突變體卻不能泛素化T H l 蛋白。體外泛素化實驗進一步說明了E 6 - A P 在體外重組的泛素化系統(tǒng)中，同

4、樣可以促進T H I 蛋白的泛素化，并且在此系統(tǒng)中加入蛋白酶體抑制劑M G l 3 2 可以阻斷E 6 ．A P 對T H l 蛋白的這種泛素化降解。因此，我們的實驗證實T H l 蛋白的確是E 6 - A P 這個經(jīng)典的泛素連接酶的新的特異性底物。關鍵詞：T H l ／E 6 - A P ／相互作用／泛素似降解縮略詞；T H l ，t r i h y d r o p h o b i n 1 ；E 1 ，泛素活化酶；E 2 ，泛素共軛酶