白紋伊蚊唾液腺Antigen-5基因家族成員生物信息學(xué)分析與原核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、[目的]Antigen-5基因家族成員廣泛存在于吸血節(jié)肢動(dòng)物唾液轉(zhuǎn)錄組中。我們前期的研究結(jié)果顯示吸血可以調(diào)控白紋伊蚊Antigen-5基因家族成員(Ab-AG3)的表達(dá)。為進(jìn)一步探討Ab-AG3基因在蚊蟲吸血傳病中的作用，本研究利用生物信息學(xué)分析比較Antigen-5家族4個(gè)基因的異同，篩選出Ab-AG3和Ab-AG4基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測它們在唾液腺、脂肪體和中腸中的表達(dá)量，并構(gòu)建了Ab-AG3原核表達(dá)載體，為下一步表達(dá)和功能

2、研究奠定基礎(chǔ)。
　　[方法]采用生物信息學(xué)方法對白紋伊蚊Ae.albopictus雌蚊唾液腺中識別出的Antigen-5基因家族4個(gè)成員（Ab-AG1、Ab-AG2、Ab-AG3和Ab-AG4）進(jìn)行生物信息學(xué)分析；進(jìn)而采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測了Ab-AG3、Ab-AG4基因在唾液腺、中腸和脂肪體中的表達(dá)。最后通過基因工程技術(shù)構(gòu)建原核表達(dá)載體。
　　[結(jié)果]在Ae.albopictus雌蚊唾液腺cDNA文庫中共識別出4條

3、編碼Antigen-5基因家族的成員，分別是：Ab-AG1（AAV90675.1）基因全長783bp編碼260個(gè)氨基酸；Ab-AG2（AAV90676.1）基因全長783bp編碼258個(gè)氨基酸；Ab-AG3（AAV90677.1）基因全長768bp編碼255個(gè)氨基酸和Ab-AG4（AAV90699.1）基因全長771bp編碼256個(gè)氨基酸。它們都是堿性蛋白，分子量均在28000-30000之間，都具有1個(gè)SCP結(jié)構(gòu)域。通過氨基酸多重序列

4、比對后聚類分析，發(fā)現(xiàn)基因Ab-AG1和Ab-AG4、Ab-AG2和Ab-AG3分別隸屬于兩個(gè)分支，前者包括庫蚊屬、伊蚊屬及按蚊屬蚊蟲，后者只包括庫蚊屬和伊蚊屬蚊蟲；三維模建顯示兩分支的蛋白有顯著結(jié)構(gòu)差異。進(jìn)一步從兩個(gè)分支中各挑選出Ab-AG4與Ab-AG3兩個(gè)基因檢測它們在唾液腺、中腸和脂肪體3種組織中的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)蛋白均在蚊蟲唾液腺中特異高表達(dá)。最后成功從蚊蟲唾液腺中克隆獲得Ab-AG3和Ab-AG4全長序列，并構(gòu)建pET-30a