小鼠類胚體細胞對膠質瘤模型的趨化作用研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文小鼠類胚體細胞對膠質瘤模型的趨化作用研究姓名：毛更生申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)外科學指導教師：只達石20060506天津隧科犬學博士舉但論文摘要基的；戲察來源予麟魄，去0IF類般體除段stin鼯瞧蔻體纓髓于∞黢鬟瘸模藿爨健及對贛l譙渣入焉鎊對簸覆瘩鋤糖霸速踩及定淹遷移現(xiàn)象，與冀德學者的不問種旋或同炭而不同分化階段的千細胞的趨化現(xiàn)象比較，結合該前體緇麓體卦transwen趨傀實驗裁遷移機制徽椰步探討并為下一步以該

2、蘸體纈脆為載體的基因治療佟撩蟄。方法：酋先培養(yǎng)用于遷移實驗的繃胞，即源予類胚體艙nestin陽性翦體鲴腱。復棼，j、熬Es纓驄，傳2代蘑溺豫或蕈鱗脆，～綴于分純蘺對囂s避行耩卷抗攥sS飄一l染色鑒定；努一緞埔撇豫LIF酌ES培養(yǎng)蒺lO％FBS培養(yǎng)lO靈，纓藐鑫摟葶爭潛靜單纓耱投成懸浮鷸翟搿細胞溺，靜類驅舔。然后將粥鱺船胰簿消純并轉移至d醬通培養(yǎng)越中，貼懿生長2天，進行sSE盎^一l抗體兔疫組《也染色，及Es標志轉蒙因子Oot一4和類胚體

3、標志基因ne8tin的RT～PcR檢測。以293T為靚裝綴臌制器GFP一饅病毒，轉染Es細腿，男轉染NIi鞋3細臆終為實驗對糕綴；熒巍染料p疆28檬毽G6黢矮瘸纓耱。溺焚巍潮譬顯徽鏡蕊察綴緩泳涼弱片魄熒光強度并檢測綱藏活力。成功競成紉鼴揀記屢避行體蠹實驗。褒瓣瘤藏譴瀲疑對側半球移植入nestin粥性酌類輕悻緩魏，通過跟蹤GFP熒光綱臆，躐黎研究該細胞針對腫瘸的遷移表現(xiàn)，相悶方法觀察對照組3T3細胞是蔭向膠質瘤定向遷移；在transwel

4、l趨億遷移系統(tǒng)中實藤體外實驗，對姚前體緇胞鐘對e6條轉培莽基、壤莽豢及HBss的過膜纓腿數(shù)。結果：分化12天后的類胚體鲴胞n8sti＆染色陽性明攝，RT—PcR檢測nestin圉鏈，Oot4弱鼷性。在閨帶綠色熒巍黲G轉一溪瘸黲轉染囂s綢穩(wěn)及NIH33雛魏、紅色熒光染料p疆2s標記c8腔覆瘤細胞看，熒光顯徽鏡下覓Es繃腕、NIH3T3纓黲發(fā)囂蔻繯憊熒光，撬麓素篩選詹，丈予98％酌紐胞攜袋GFP。同樣毒大予98瓤的c6膠旗瘸細胞被縶上亮紐魏