小鼠類(lèi)胚體細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤模型的趨化作用研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文小鼠類(lèi)胚體細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤模型的趨化作用研究姓名：毛更生申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：神經(jīng)外科學(xué)指導(dǎo)教師：只達(dá)石20060506天津隧科犬學(xué)博士舉但論文摘要基的；戲察來(lái)源予麟魄，去0IF類(lèi)般體除段stin鼯瞧蔻體纓髓于∞黢鬟瘸模藿爨健及對(duì)贛l譙渣入焉鎊對(duì)簸覆瘩鋤糖霸速踩及定淹遷移現(xiàn)象，與冀德學(xué)者的不問(wèn)種旋或同炭而不同分化階段的千細(xì)胞的趨化現(xiàn)象比較，結(jié)合該前體緇麓體卦transwen趨傀實(shí)驗(yàn)裁遷移機(jī)制徽椰步探討并為下一步以該

2、蘸體纈脆為載體的基因治療佟撩蟄。方法：酋先培養(yǎng)用于遷移實(shí)驗(yàn)的繃胞，即源予類(lèi)胚體艙nestin陽(yáng)性翦體鲴腱。復(fù)棼，j、熬Es纓驄，傳2代蘑溺豫或蕈鱗脆，～綴于分純蘺對(duì)囂s避行耩卷抗攥sS飄一l染色鑒定；努一緞埔撇豫LIF酌ES培養(yǎng)蒺lO％FBS培養(yǎng)lO靈，纓藐鑫摟葶爭(zhēng)潛靜單纓耱投成懸浮鷸翟搿細(xì)胞溺，靜類(lèi)驅(qū)舔。然后將粥鱺船胰簿消純并轉(zhuǎn)移至d醬通培養(yǎng)越中，貼懿生長(zhǎng)2天，進(jìn)行sSE盎^一l抗體兔疫組《也染色，及Es標(biāo)志轉(zhuǎn)蒙因子Oot一4和類(lèi)胚體

3、標(biāo)志基因ne8tin的RT～PcR檢測(cè)。以293T為靚裝綴臌制器GFP一饅病毒，轉(zhuǎn)染Es細(xì)腿，男轉(zhuǎn)染NIi鞋3細(xì)臆終為實(shí)驗(yàn)對(duì)糕綴；熒巍染料p疆28檬毽G6黢矮瘸纓耱。溺焚巍潮譬顯徽鏡蕊察綴緩泳涼弱片魄熒光強(qiáng)度并檢測(cè)綱藏活力。成功競(jìng)成紉鼴揀記屢避行體蠹實(shí)驗(yàn)。褒瓣瘤藏譴瀲疑對(duì)側(cè)半球移植入nestin粥性酌類(lèi)輕悻緩魏，通過(guò)跟蹤GFP熒光綱臆，躐黎研究該細(xì)胞針對(duì)腫瘸的遷移表現(xiàn)，相悶方法觀察對(duì)照組3T3細(xì)胞是蔭向膠質(zhì)瘤定向遷移；在transwel

4、l趨億遷移系統(tǒng)中實(shí)藤體外實(shí)驗(yàn)，對(duì)姚前體緇胞鐘對(duì)e6條轉(zhuǎn)培莽基、壤莽豢及HBss的過(guò)膜纓腿數(shù)。結(jié)果：分化12天后的類(lèi)胚體鲴胞n8sti＆染色陽(yáng)性明攝，RT—PcR檢測(cè)nestin圉鏈，Oot4弱鼷性。在閨帶綠色熒巍黲G轉(zhuǎn)一溪瘸黲轉(zhuǎn)染囂s綢穩(wěn)及NIH33雛魏、紅色熒光染料p疆2s標(biāo)記c8腔覆瘤細(xì)胞看，熒光顯徽鏡下覓Es繃腕、NIH3T3纓黲發(fā)囂蔻繯憊熒光，撬麓素篩選詹，丈予98％酌紐胞攜袋GFP。同樣毒大予98瓤的c6膠旗瘸細(xì)胞被縶上亮紐魏