肌酐、尿酸干化學(xué)檢測(cè)試紙條的臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　在原肌酐、尿酸酶法試劑盒中添加新色原物質(zhì)TBHBA，提高肌酐、尿酸酶學(xué)檢測(cè)方法的靈敏度，在其理論基礎(chǔ)支持下研究出一種具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的，高度靈敏的、快速檢測(cè)肌酐、尿酸干化學(xué)試紙條，為臨床監(jiān)測(cè)腎功能水平，尤其是對(duì)家庭監(jiān)測(cè)慢性腎病(CKD)患者腎功能的變化和終末期腎病(ESRD)患者透析效果的判斷提供一種簡(jiǎn)便、快捷定量/半定量的可靠的檢測(cè)手段。
　　方法：
　　1.建立高靈敏度新色原酶學(xué)檢測(cè)方法:選擇高純度的新

2、色原2，4，6-三溴-3-羥基苯甲酸(TBHBA)添加到肌酐、尿酸檢測(cè)試劑盒的R1試劑中，混勻后作為新色原試劑。通過(guò)全波段掃描檢測(cè)新色原試劑的最佳比色波長(zhǎng);根據(jù)濃度-吸光度曲線(xiàn)選擇TBHBA的最佳濃度;通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)確定新方法試劑比例和最佳樣品量;采用最佳檢測(cè)參數(shù)，評(píng)估新色原檢測(cè)方法的的各項(xiàng)性能，確定TBHBA對(duì)提高檢測(cè)靈敏度的可行性提供依據(jù)。
　　2.試紙條的制作:首先微孔反應(yīng)板上進(jìn)行大量濕化學(xué)試驗(yàn)，探索紙片反應(yīng)體系的最佳條件參數(shù)

3、;配制濾紙浸漬液，手工制作肌酐、尿酸酶促檢測(cè)試紙條。
　　3.標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作:在微孔反應(yīng)板上進(jìn)行濕化學(xué)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)一系列樣本標(biāo)準(zhǔn)液反應(yīng)后的顏色深淺梯度，制作試紙條結(jié)果判讀的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
　　4.試紙條的評(píng)價(jià):檢測(cè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和臨床血清標(biāo)本，對(duì)比全自動(dòng)分析儀測(cè)定的肌酐、尿酸濃度，分析自制試紙條檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性，評(píng)價(jià)自制肌酐、尿酸試紙條的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　1.高靈敏度肌酐、尿酸檢測(cè)新方法的參數(shù)分別為

4、:檢測(cè)波長(zhǎng)為520nm、510nm，TBHBA濃度為3g/L、5g/L，最大樣本添加量為20μL15μL，最佳試劑比例為3∶1、4∶1。
　　2.肌酐、尿酸酶學(xué)新方法線(xiàn)性回歸方程分別為y=0.0006x+0.0165、y=0.0009x-0.0209。線(xiàn)性范圍分別為12.5μmol/L～1000μmol/L、40μmol/L～1600μmol/L，該范圍涵蓋了正常人和腎病患者的肌酐、尿酸水平，滿(mǎn)足臨床檢測(cè)需要。新方法檢測(cè)反應(yīng)顯色能

5、穩(wěn)定2小時(shí)，肌酐和尿酸高、低值標(biāo)準(zhǔn)品的CV值分別是2.02％、4.13％和3.25％、2.86％。新色原試劑4℃能保存2個(gè)月。新色原方法與原試劑盒比較，靈敏度分別是原方法的2倍和1.5倍。
　　3.研發(fā)制作了肌酐、尿酸檢測(cè)試紙條和標(biāo)準(zhǔn)比色卡;試紙條制作過(guò)程中浸漬時(shí)間為10秒，試紙條檢測(cè)樣本量為15μL，檢測(cè)結(jié)果最佳終點(diǎn)觀察時(shí)間為20～30min;臨床血清標(biāo)本檢測(cè)，試紙條檢測(cè)分組的血清樣本生化檢測(cè)，濃度均值和中位數(shù)均在試紙條設(shè)置的理

6、論區(qū)間內(nèi)，自制試紙條半定量結(jié)果與全自動(dòng)生化儀測(cè)定濃度基本符合。
　　結(jié)論：
　　1.選擇以TBHBA為色原能有效提高肌酐、尿酸酶學(xué)檢測(cè)方法的靈敏度，為肌酐、尿酸干化學(xué)檢測(cè)試紙條的研究提供可靠依據(jù)。
　　2.肌酐、尿酸干化學(xué)檢測(cè)試紙條測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性好，可半定量/定量檢測(cè)到肌酐、尿酸低濃度水平的樣本，理論上支持唾液樣本肌酐、尿酸的檢測(cè)。
　　3.肌酐、尿酸干化學(xué)檢測(cè)試紙條攜帶方便、檢測(cè)快捷，為臨床監(jiān)測(cè)腎功