玉屏風(fēng)提取液對(duì)環(huán)磷酰胺致大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用觀察及其質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的 1．研究用環(huán)磷酰胺建立大鼠骨質(zhì)疏松的動(dòng)物模型，并觀察該類型骨質(zhì)疏松的骨形態(tài)計(jì)量學(xué)、骨代謝和骨生物力學(xué)的改變情況。2．探討玉屏風(fēng)提取液對(duì)此類型的骨質(zhì)疏松的骨形態(tài)計(jì)量學(xué)、骨代謝和骨生物力學(xué)的影響。3．建立起玉屏風(fēng)提取液的指紋圖譜，從而為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及日后有效成分的尋找打下基礎(chǔ)。 方法 1．藥理學(xué)部分40只大鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組(control組)：灌胃給予5ml/Kg.d生理鹽水。環(huán)磷酰胺組(CP組)

2、：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5mg/Kg.d。玉屏風(fēng)提取液組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5mg/Kg.d及玉屏風(fēng)提取液(YPF組)5ml/Kg.d，碳酸鈣+VD組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5mg/Kg.d及0．4mg/kg.d。于實(shí)驗(yàn)第15d處死動(dòng)物，取左側(cè)脛骨進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量動(dòng)靜態(tài)學(xué)參數(shù)骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb．At)，骨小梁厚度(Tb．Th)，骨小梁數(shù)量(Tb．N)，骨小粱分離度(Tb．SP)，動(dòng)態(tài)參數(shù)包括熒光標(biāo)志周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)(％L．Pm)，礦化沉

3、積率(MAR)，骨小粱周長(zhǎng)形成率(BFR/BS)，骨小粱面積形成率(BFR/BV)，骨小粱體積形成率(BFR/TV)測(cè)量；取右側(cè)股骨，進(jìn)行骨生物力學(xué)參數(shù)彈性載荷，彈性橈度，最大載荷，最大橈度，剛度，骨鈣，骨磷，骨鎂及骨羥脯氨酸含量測(cè)定。 2．質(zhì)量控制部分重復(fù)提取玉屏風(fēng)提取液10份，通過(guò)HPLC建立起合適的分析方法對(duì)其中成分進(jìn)行分析，找出其中穩(wěn)定存在的共有峰，建立玉屏風(fēng)提取液指紋圖譜。 結(jié)果 1．環(huán)磷酰胺及玉屏風(fēng)提

4、取液對(duì)大鼠骨形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的影響與對(duì)照組比較，環(huán)磷酰胺模型組大鼠脛骨松質(zhì)骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)靜念參數(shù)4個(gè)指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb．Ar)降低了48.5％(P<0.05)、骨小梁厚度(Tb.Th)降低了17.9％(P<0.05)、骨小梁分離度(Tb.Sp)(P<0.01)增加了67.9％(P<0.05)；骨小梁數(shù)量(Tb.N)降低了37.8％(P<0.01)。動(dòng)態(tài)參數(shù)方面，熒光周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)％L.Pm減少了54.5％，骨

5、礦化沉積率MAR，骨形成率BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV分另U降低了21.6％、61.0％、50.0％、72.2％(P<0.05)。骨吸收參數(shù)方面，與對(duì)照組比較，環(huán)磷酰胺組單位骨小梁面積破骨細(xì)胞數(shù)(Oc.N)、破骨細(xì)胞周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)(％Oc.Pm)。與環(huán)磷酰胺模型組相比，玉屏風(fēng)提取液組使％Tb.Ar增加了127.7％(P<0.01)，Tb.Th增加了27.3％(P<0.01)，Tb.N增加了75.6％(P<0.01)，Tb.SP減

6、少了43.1％(P<0.05)，動(dòng)態(tài)學(xué)參數(shù)方面，％LPm增加了114.0％，MAR增加了61.5％(P<0.01)，BFR/BS增加了278.6％(P<0.05)，BFR/BV增加了191.5％(P<0.05)，BFR/TV增加了410.0％(P<0.05)，骨吸收參數(shù)方面，Oc.N、％Oc.Pm差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.環(huán)磷酰胺及玉屏風(fēng)提取液對(duì)大鼠骨生物力學(xué)的影響與對(duì)照組相比，環(huán)磷酰胺模型組骨生物力學(xué)的兩個(gè)指標(biāo)最大載荷(降低了1

7、6.2％)及剛度(降低了27.7％)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，玉屏風(fēng)提取液組的兩個(gè)指標(biāo)最大載荷(增加了25.7％)及剛度(增加了67.9％)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3.環(huán)磷酰胺及玉屏風(fēng)提取液對(duì)大鼠骨鈣及骨羥脯氨酸含量的影響與對(duì)照組比較：環(huán)磷酰胺模型組大鼠脛骨骨代謝5個(gè)指標(biāo)骨羥脯氨酸/骨干重(降低了26.1％)、骨有機(jī)質(zhì)/骨干重(降低了26.1％)、骨鈣總量/骨干重(降低了17.6％)、骨磷總量/

8、骨干重(降低了12.4％)及骨鎂總量/骨干重(降低了24.7％)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較：玉屏風(fēng)提取液組大鼠脛骨骨代謝5個(gè)指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中骨鈣總量/骨干重(增加了22.0％)(P<0.01)；骨鎂總量/骨干重(增加了38.4％)、骨磷總量/骨干重(增加了23.4％)、骨羥脯氨酸/骨干重(增加了42.9％)及骨有機(jī)質(zhì)/骨干重(增加了42.9％)(P

9、批樣品的平均值，以保留時(shí)間與黃芪甲苷峰一致的峰為參照峰，標(biāo)定了9個(gè)共有指紋峰及其相對(duì)保留時(shí)間如下：1(0.0992～0.1062)，2(0.3657～0.3922)，3(0.6714～0.6832)，4(0.8412～0.8444)，5(0.8647～0.8758)，6(0.8912～0.8967)，7(0.9429～0.9492)，8(0.9526～0.9561)，9(1.2044～1.2089)，各共有指紋峰相對(duì)保留時(shí)間RSD在0.

10、11％～2.88％之間。標(biāo)定的9個(gè)共有指紋峰及其相對(duì)峰面積如下：1(0.2489～0.2764)，2(0.0916～0.1073)，3(0.1032～0.1109)，4(0.1382～0.1541)，5(0.0878～0.1120)，6(0.2615～0.2948)，7(0.1125～0.1214)，8(0.1280～0.1635)，9(0.4309～0.4601)，各共有指紋峰相對(duì)峰面積的RSD在1.62％～8.15％之間。