JDP2(Jun dimerization protein2)與人胰腺癌EMT之間關(guān)系的研究.pdf

1、前言：
　　 胰腺癌是一種發(fā)病隱匿、進(jìn)展迅速、治療效果及預(yù)后極差的消化道惡性腫瘤。患者診斷為胰腺癌后5年生存率小于5%。這種極差的預(yù)后主要與其發(fā)生早期微轉(zhuǎn)移及患者臨床癥狀不顯著有關(guān)。因此,探索新的胰腺癌的分子標(biāo)志物對于胰腺癌的治療具有重要意義。
　　 Epithelial-to-mescnchymaltransition(EMT)是上皮細(xì)胞呈現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)。上皮細(xì)胞形成EMT主要標(biāo)志有如:上皮標(biāo)志物E-cadherin

2、表達(dá)的降低以及間質(zhì)標(biāo)志物vimentin、snail及N-cadhedn表達(dá)的升高。在典型的EMT的模型中,細(xì)胞與細(xì)胞之間失去極性,呈現(xiàn)出典型的形態(tài)學(xué)改變。形成EMT的細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)侵襲能力。越來越多的證據(jù)證明EMT與多種生長因子有關(guān),如轉(zhuǎn)移生長因子(TGF-β1),表皮生長因子(EGF)等。但是,EMT形成的機(jī)制到目前為止還不是非常明確。
　　 Jundimerizationprotein2(JDP2),作為AP-1類抑制因子

3、之一,最初是作為AP-1成員之一的c-Jun的結(jié)合蛋白分離出來的。AP-1是由Jun,Fos或ATF蛋白系列所構(gòu)成的二聚體,其功能涉及細(xì)胞周期調(diào)節(jié),細(xì)胞分化,凋亡及腫瘤的發(fā)生等方面。JDP2由163個(gè)氨基酸組成,并含有一個(gè)堿性亮氨酸拉鏈(basicleucinezipper,bZIP)結(jié)構(gòu)。JDP2可以和自身以及c-Jun,JunB,JunD或ATF-2形成二聚體,并抑制Jun,c-Fos和ATF-2等的轉(zhuǎn)錄活性,顯示JDP2是一種廣泛

4、的AP-1抑制蛋白。在深入研究其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的過程中,課題組成員發(fā)現(xiàn),JDP2是通過回收HDAC3(histonedeacetylase3)到原癌基因c-jun的調(diào)控領(lǐng)域的方式來抑制其表達(dá)。
　　 目的：
　　 研究JDP2與人胰腺癌EMT之間的關(guān)系。通過探討JDP2與人胰腺癌EMT之間的關(guān)系來找到可能的新的胰腺癌早期治療、診斷的靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 我們選擇36例自2000年2月至2003年11月

5、在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除胰腺癌標(biāo)本。BxPC3細(xì)胞用含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng),同時(shí)在培養(yǎng)基中加入EGF(100ng/ml)以及TGF-β1(10ng/m1),之后用pCEFL-HA-JDP2質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染上述BxPC3細(xì)胞。pGEX-ATF2質(zhì)粒被瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至Capan2胰腺癌細(xì)胞系中,48小時(shí)后繼續(xù)用TGF-β1(10ng/ml)誘導(dǎo)48小時(shí)。如上細(xì)胞均經(jīng)Westernblot、RT-PCR、qRT-PCR、tran

6、swell侵襲實(shí)驗(yàn)、MTT及免疫熒光檢測。
　　 結(jié)果：
　　 為了驗(yàn)證JDP2的表達(dá)與胰腺癌之間的關(guān)系,我們應(yīng)用Westernblot檢測36胰腺癌標(biāo)本癌和癌旁的JDP2蛋白表達(dá),結(jié)果證明所有癌組織的JDP2表達(dá)明顯低于癌旁組織。我們還發(fā)現(xiàn)TGF-β1聯(lián)合EGF共同誘導(dǎo)可使BxPC3細(xì)胞產(chǎn)生EMT.而這種EMT可以被過表達(dá)的JDP2所逆轉(zhuǎn)。而過表達(dá)ATF2的Capan2細(xì)胞對TGF-β1的刺激變得更加敏感,產(chǎn)生EMT.