KDR特異性啟動子-增強子調控PI3K信號通路對大鼠血管內皮細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：4管內皮細胞(vascularendothelialcells，VEC)是血管的主要結構之一，VEC損傷導致的早期血栓形成是冠狀動脈旁路移植術后移植血管狹窄的啟動因素，促進VEC的修復再生可有效防治移植血管狹窄。本實驗針對大鼠VECPI3Kp110β亞單位編碼基因Pik3cb，利用RNA干擾技術，構建KDR特異性啟動子/增強子真核表達載體，通過脂質體轉染大鼠VEC，探討其對大鼠VEC增殖和凋亡的影響，進一步探索移植血管狹窄的防治方

2、法。
　　 方法：根據Genbank中PI3Kp110β亞單位編碼基因Pik3cbmRNA序列，按照shRNA設計原則，分別構建大鼠VEC特異性KDR真核表達載體KDR-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA和非特異性CMV真核表達載體CMV-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA。經脂質轉染試劑LipofectaminTM2000轉染大鼠VEC，實驗分為5組，A組：正常VEC組；B組：轉染特異性質粒KDR-

3、pGenesil-10-Pik3cb-shRNA組；C組：轉染非特異性質粒CMV-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA組；D組：轉染陰性對照空質粒組；E組：陽性對照組(wortmannin)。分別于轉染24h、48h和72h，流式細胞法檢測轉染效率，實時熒光定量PCR方法檢測各組細胞Pik3cbmRNA的相對表達量，CCK-8法和流式細胞法檢測各組細胞增殖和凋亡水平。
　　 結果：轉染24h、48h和72h，轉染效率

4、分別為（35.2±4.6）％，（25.7±1.8）％和(16.7±1.6)％；實時熒光定量PCR方法測得KDR組Pik3cbmRNA相對表達量分別為(54.82±2.77)％，（50.54±3.98）％和（35.47±4.83）％，均明顯低于正常對照組(P＜0.05)；CCK-8法測得KDR組細胞抑制率分別為（21.98±2.25）％，（24.32±3.04）％和（26.38±5.06）％；流式細胞法測得KDR組細胞凋亡率分別為（9.8