富血小板血漿和帶血管肌筋膜在組織工程骨血管化中的作用.pdf

1、本文探討了富血小板血漿和帶血管肌筋膜在組織工程骨血管化中的作用。 [目的] 1、分離培養(yǎng)犬骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，體外擴增并向成骨細胞誘導分化，探討其作為骨組織工程種子細胞的可能性。 2、制備犬同種異體脫鈣骨基質(zhì)(demineralizedbonematrix，DBM)，研究DBM作為骨組織工程支架材料的可能性。 3、研究應用富血小板血漿(platelet-

2、richplasma,PRP)、帶血管肌筋膜對組織工程骨血管化的影響. [方法] 1、從犬骨髓分離MSCs，體外培養(yǎng)擴增，并用含地塞米松(10mol/L)，β-甘油磷酸鈉(10mmol/L)和維生素C(50mg/L)的成骨誘導培養(yǎng)基成骨誘導培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)，MTT法測定細胞生長曲線。成骨誘導細胞行改良鈣鈷法堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)染色，并應用VonKossa法、茜素紅法

3、進行鈣結(jié)節(jié)染色。 2、雜種犬的股骨行脫脂、脫鈣、脫非膠原蛋白、冷凍干燥、滅菌制成DBM，與MSCs復合，分別在不同時間應用倒置顯微鏡、掃描電鏡觀察脫鈣骨基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及細胞在材料表面的生長情況。 3、將DBM/MSCs復合體植入12只犬背部，根據(jù)是否加入PRP和被帶血管肌筋膜包裹分為4組。分別在術(shù)后4周、8周12周各處死4只犬，行大體標本、X線、組織學檢查。 [結(jié)果] 1、用密度梯度法分離的MSCs，細胞純度

4、高，增殖能力活躍，誘導成骨分化的MSCs由梭形、三角形變?yōu)樽優(yōu)榉叫巍⒍嘟切?，其ALP及鈣結(jié)節(jié)染色均為陽性。犬MSCs和成骨誘導細胞的生長曲線呈典型的S形。 2、同種異體脫鈣骨基質(zhì)具有三維立體網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，平均孔隙自徑約為254.39±88.71μm，孔隙率約70％。與MSCs復合培養(yǎng)后，細胞黏附其上，上架率高，生長狀態(tài)良好，增殖迅速，分泌大量細胞外基質(zhì)。 3、各時間點A組、B組、C組在成骨的量、骨光密度、血管化程度均明顯優(yōu)于