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文檔簡介
1、目的:觀察蛇葡萄素(Amp)單用或與阿霉素(ADM)聯(lián)用對(duì)人紅白血病細(xì)胞株K562、小鼠淋巴瘤細(xì)胞株YAC-1增殖的抑制作用及與ADM的協(xié)同作用,同時(shí)觀察Amp對(duì)耐ADM的人紅白血病細(xì)胞株K562/ADM耐藥的逆轉(zhuǎn)作用,初步探討其作用機(jī)制。 方法:Amp單用或與ADM聯(lián)用,MTT比色法檢測(cè)K562、YAC-1和K562/ADM細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞儀觀察K562/ADM細(xì)胞凋亡和P-糖蛋白(P-gp)表達(dá)水平的變化;透射電鏡分析K5
2、62/ADM細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化;激光掃描聚焦顯微鏡(CLSM)測(cè)定K562/ADM細(xì)胞內(nèi)Ca2+、Mg2+、ADM濃度、pH值、活性氧和線粒體膜電位的變化。 結(jié)果:1.Amp分別對(duì)K562、K562/ADM、YAC-1細(xì)胞增殖有顯著的時(shí)間和濃度依賴性抑制作用。Amp1.56、3.13、6.25mg/L與ADM(0.031~1.0mg/L)聯(lián)用可降低ADM的IC50,協(xié)同抑制K562、YAC-1細(xì)胞的增殖。 2.ADM(0
3、.31~10mg/L)單獨(dú)或加Amp(1.56、3.13、6.25mg/L)培養(yǎng)48h后,耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為3.79、1.72、2.33;培養(yǎng)72h后,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為4.16、2.32、2.64。 3.對(duì)K562/ADM細(xì)胞的流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果表明,Amp不影響細(xì)胞P-gp的表達(dá)。細(xì)胞凋亡率測(cè)定結(jié)果,ADM(10mg/L)單用組為6.1%,ADM10mg/L加Amp1.56、3.13或7.25mg/L,使凋亡率分別增加至17.1
4、%、18.6%和15.8%。細(xì)胞周期分析表明,ADM可使細(xì)胞阻滯于G1期,同時(shí)G0期細(xì)胞消失;Amp在不影響細(xì)胞周期的濃度時(shí),使ADM處理細(xì)胞阻滯于G2/M期,而G1期細(xì)胞減少。 電鏡觀察表明,經(jīng)ADM10mg/L、Amp7.13mg/L單獨(dú)作用96h后,未出現(xiàn)明顯凋亡特征。經(jīng)ADM10mg/L+Amp3.56mg/L作用后,K562/ADM細(xì)胞出現(xiàn)明顯凋亡形態(tài)學(xué)改變。CLSM顯示,ADM10.0mg/L與Amp(3.56、7.
5、13mg/L)聯(lián)合處理K562/ADM細(xì)胞,可增加K562/ADM細(xì)胞內(nèi)的ADM含量(P<0.05);蛇葡萄素單用或與阿霉素聯(lián)用后,K562/ADM細(xì)胞內(nèi)Mg2+濃度、pH值和活性氧水平無明顯變化。Amp1.78、7.13mg/L與ADM(10mg/L)聯(lián)用時(shí),細(xì)胞的線粒體膜電位升高(P<0.05)。 1.Amp在體外有明顯的抗白血病細(xì)胞增殖的活性,并與ADM明顯協(xié)同,逆轉(zhuǎn)耐藥腫瘤細(xì)胞K562/ADM對(duì)ADM的耐藥性。
6、2.Amp能增強(qiáng)ADM誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。 3.Amp使ADM阻滯562/ADM細(xì)胞G1期的作用轉(zhuǎn)變?yōu)樽铚?xì)胞于G2/M期。 4.Amp增強(qiáng)ADM誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制與細(xì)胞內(nèi)Mg2+、H+和活性氧的變化無關(guān)。5.Amp不抑制K562/ADM細(xì)胞mdrl/P-gp的表達(dá),其逆轉(zhuǎn)耐藥與mdrl/P-gp的表達(dá)無關(guān)??赡芡ㄟ^增加細(xì)胞內(nèi)ADM聚積,抑制P-gp的功能,增強(qiáng)ADM誘導(dǎo)凋亡的作用,從而逆轉(zhuǎn)K562/ADM細(xì)胞的耐藥性。
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