川芎嗪協(xié)同環(huán)孢霉素A逆轉(zhuǎn)淋巴瘤耐藥與機(jī)制研究.pdf

1、目的和背景： 化療是治療淋巴瘤的主要手段，雖然通過(guò)化療或合并放療可使約60％的霍奇金淋巴瘤和30％的非霍奇金淋巴瘤長(zhǎng)期存活，但仍有40％-60％左右的惡性淋巴瘤患者經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)治療4-6療程以上不能達(dá)到完全緩解，即原發(fā)耐藥，30％左右的患者在完全緩解后復(fù)發(fā)甚至死亡。惡性淋巴瘤治療失敗的主要原因在于淋巴瘤細(xì)胞產(chǎn)生了耐藥性，產(chǎn)生耐藥性的原因很多，其中多藥耐藥是重要原因之一。想辦法逆轉(zhuǎn)惡性淋巴瘤的多藥耐藥，是進(jìn)一步提高其治愈率的重要方法。解

2、決惡性淋巴瘤（ML）細(xì)胞多藥耐藥的問(wèn)題已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。已知P-gp的過(guò)度表達(dá)可使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥（multidrug resistance，MDR），并已證實(shí)它與ML的療效密切相關(guān)。隨著對(duì)MDR研究的不斷深入，逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的藥物研究亦變得越來(lái)越重要。目前專指能逆轉(zhuǎn)多藥耐藥基因蛋白（P-gp）陽(yáng)性的MDR細(xì)胞抗藥性的藥物，包括鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)蛋白抑制劑、谷胱甘肽耗竭劑、抗雌激素類藥物、環(huán)孢菌素類等多種，其中以鈣通道

3、阻滯劑和環(huán)孢菌素類應(yīng)用最廣，而聯(lián)合中藥成分單體的應(yīng)用前景看好，有待深入研究。本課題通過(guò)對(duì)川芎嗪協(xié)同環(huán)孢霉素A對(duì)淋巴瘤細(xì)胞多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的研究，揭示其對(duì)惡性淋巴瘤細(xì)胞多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)及其逆轉(zhuǎn)機(jī)制，并為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，從而進(jìn)一步提高惡性淋巴瘤的治愈率。 材料和方法： 購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)的Raji淋巴瘤細(xì)胞經(jīng)過(guò)長(zhǎng)春新堿長(zhǎng)時(shí)間的大劑量沖擊誘導(dǎo)，建立耐藥的細(xì)胞株。耐藥株建立后采用MTT法測(cè)定耐藥株和正常細(xì)胞株同時(shí)對(duì)不同化療藥

4、物的藥物敏感性，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定兩株細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá)，用RT-PCR測(cè)定兩株細(xì)胞mdr1mRNA的表達(dá)，觀察耐藥細(xì)胞的多藥耐藥性，并分析多藥耐藥性和mdr1及P-gp的表達(dá)的關(guān)系。分別用川芎嗪和環(huán)孢霉素A以及兩者的聯(lián)合作用于耐藥株，進(jìn)行耐藥逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)，分別用MTT法、流式細(xì)胞儀和RT-PCR測(cè)定逆轉(zhuǎn)前后細(xì)胞株的藥物敏感性和P-gp及mdr1的表達(dá)。分析兩者的逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制。用SPSS10．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，全部檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P<

5、0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1．淋巴瘤細(xì)胞株的耐藥性與mdr1和P-gp的表達(dá)有關(guān)。 2．環(huán)孢霉素A和川芎嗪兩者單獨(dú)作用于耐藥淋巴瘤細(xì)胞株均可逆轉(zhuǎn)后者的耐藥性，且兩者聯(lián)合有協(xié)同作用，環(huán)孢霉素A聯(lián)合川芎嗪兩者共同作用于耐藥細(xì)胞株的作用>環(huán)孢霉素A的逆轉(zhuǎn)作用+川芎嗪的逆轉(zhuǎn)作用。 3．川芎嗪和環(huán)孢霉素A的逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制與細(xì)胞內(nèi)藥物泵出減少有關(guān)，和mdr1以及P-gp的表達(dá)相關(guān)。 結(jié)論：