EGF與CNTF基因共轉(zhuǎn)染對脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：研究表皮生長因子(Epidermalgrowthfactor,EGF)與睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(Ciliaryneurotrophicfactor,CNTF)基因共轉(zhuǎn)染對脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)以及促進(jìn)反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞逆分化的作用,并探討其機(jī)制。
　　方法：4月齡SPF級SD大鼠共96只,體重約230g,雌雄不限,將其隨機(jī)平均分為EGF轉(zhuǎn)染組(A組),CNTF轉(zhuǎn)染組(B組),CNTF與EGF共轉(zhuǎn)染組(C組)和對照組(D組)4組,

2、每組24只。采用改良Allen’s法制備大鼠脊髓損傷模型,后應(yīng)用Alzet微滲透壓泵分別向A、B、C組和D組持續(xù)轉(zhuǎn)染重組EGF與CNTF質(zhì)粒和空白質(zhì)粒各5μg(A組單獨(dú)EGF轉(zhuǎn)染,B組單獨(dú)CNTF轉(zhuǎn)染,C組EGF與CNTF共轉(zhuǎn)染,D組為空白質(zhì)粒)。在術(shù)后1、2、4、6周采用BBB運(yùn)動(dòng)功能評分系統(tǒng),斜板運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)檢測大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況;采用RT-PCR和Westernblot方法檢測EGF與CNTF基因的表達(dá);采用免疫熒光雙標(biāo)染色和組織學(xué)

3、觀察EGF與CNTF對反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖分化的影響以及脊髓組織病理變化情況。
　　結(jié)果：術(shù)后2、4、6周運(yùn)動(dòng)功能評分C組BBB評分明顯高于其余三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RT-PCR和Westernblot方法檢測顯示A組大鼠脊髓組織可見EGF,B組可見CNTFmRNA與蛋白的表達(dá),C組可見共同表達(dá),而D組則未見明顯表達(dá)。組織學(xué)觀察示C組脊髓結(jié)構(gòu)以及神經(jīng)元形態(tài)恢復(fù)較好且逐漸趨于正常,且免疫熒光雙標(biāo)染色示C組脊髓組織