全氟化碳對脂多糖致A549細(xì)胞損傷的生物學(xué)影響.pdf

1、【目的】
　　從細(xì)胞生物學(xué)角度研究全氟化碳(PFC)對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)A549細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,為臨床應(yīng)用PFC治療急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)提供理論依據(jù)。
　　【方法】
　　常規(guī)傳代培養(yǎng)人肺泡上皮樣細(xì)胞A549,將其分為四組:
　　①對照組:不作任何干預(yù);
　?、赑FC(全氟辛烷)組:按10％體積比(PFC:培養(yǎng)液)加入全氟辛烷;
　?、跮PS組:干預(yù)時(shí)按100μg/ml的濃度加入LPS;

2、
　　④PFC+LPS組(共培養(yǎng)組):按上述濃度同時(shí)加入PFC和LPS。
　　檢測以下四個方面:
　　(1)不同組A549細(xì)胞給予相應(yīng)處理后24h、48h及72h于倒置顯微鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化并拍照記錄;
　　(2)A549細(xì)胞按一定細(xì)胞數(shù)鋪板,每組3個復(fù)孔,加藥后每天應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)各組細(xì)胞數(shù)目,共6天,繪制細(xì)胞生長曲線;
　　(3)待細(xì)胞生長至融合狀態(tài)時(shí)應(yīng)用無菌槍頭于融合單層細(xì)胞上劃痕,其后按不同分組加

3、藥處理并同時(shí)換用含1%胎牛血清的培養(yǎng)液,以給藥時(shí)刻為零時(shí),分別于0h、24h及48h倒置顯微鏡下觀察劃痕愈合情況并拍照記錄,imageJ(NIH Image 1.55)軟件計(jì)算各組劃痕愈合面積百分比及劃痕邊緣細(xì)胞核間距;
　　(4)A549細(xì)胞常規(guī)傳代培養(yǎng),按不同分組給藥的同時(shí)換用含1%胎牛血清的培養(yǎng)液,24h后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡。
　　【結(jié)果】
　　(1)細(xì)胞形態(tài)學(xué)顯示LPS組較其它三組細(xì)胞明顯稀疏,皺縮明顯,部

4、分細(xì)胞呈圓形,生長狀態(tài)變差;其余三組細(xì)胞形態(tài)飽滿,排列緊密,生長狀態(tài)良好。
　　(2)細(xì)胞生長曲線顯示LPS組細(xì)胞增殖受抑制,LPS組與其余各組細(xì)胞數(shù)目的差異從加藥后第四天開始均達(dá)到了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。
　　(3)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示LPS組48小時(shí)修復(fù)面積百分比:25.3±2.1%,對照組:42.8±0.9%,PFC組:37.0±2.9%,LPS+PFC組:33.2±3.9%。LPS組與其余各組相比差異均達(dá)到了統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)顯著性(P<0.05)。劃痕邊緣細(xì)胞核間距:LPS組:20.7±2.53um,對照組:25.2±3.91um,PFC組:24.9±3.53um,LPS+PFC組:24.5±2.98um。LPS組與其它各組相比差異均達(dá)到了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。
　　(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測A549細(xì)胞凋亡表明,對照組、LPS組、PFC組及LPS+PFC組的細(xì)胞凋亡率分別為:5.33±2.55%、35.76±5.15%、5.22±2.57%及1

6、3.39±4.34%;與對照組和PFC組比較,LPS作用于A549細(xì)胞24h后,細(xì)胞的凋亡率顯著升高(P<0.01);與對照組比較,全氟化碳組細(xì)胞凋亡率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與LPS組比較,共培養(yǎng)組干預(yù)24h后,A549細(xì)胞的凋亡率顯著降低(P<0.01)。
　　【結(jié)論】
　　(1)PFC能夠顯著改善LPS對A549細(xì)胞形態(tài)及生長狀態(tài)的不良影響。
　　(2)PFC能夠顯著改善LPS對A549細(xì)胞增殖的抑制作用。