氨基甾體類衍生物對人K562和MEg-01慢粒白血病細(xì)胞的作用.pdf

1、目的:
　　觀察氨基甾體類衍生物對人慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞系和MEG-01細(xì)胞系的抑制增殖和誘導(dǎo)分化作用，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　　采用液體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和CCK-8試劑盒檢測來觀察氨基甾體類衍生物對K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞的抑制增殖能力;采用Wright染色及細(xì)胞表面CD71、CD41表面標(biāo)記物的檢測來觀察氨基甾體類衍生物對K562及MEG-01細(xì)胞系的誘導(dǎo)分化作用;采用real-time RT

2、-PCR實(shí)驗(yàn)分別檢測氨基甾體類衍生物對MEG-01細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道TRPC1基因mRNA表達(dá)的變化，以及對MEG-01細(xì)胞重組蛋白酪氨酸磷酸酯酶非受體1型PTPN1基因mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測結(jié)果顯示，氨基甾體類衍生物能有效地抑制K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞的增殖，并呈濃度依賴性;CCK-8試劑盒檢測結(jié)果顯示，不同的氨基甾體類衍生物都能抑制MEG-01細(xì)胞的增殖，抑制作用不完全相同。終濃度為10-

3、6 mol/L的氨基甾體類衍生物作用于K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞第3d后Wright染色，鏡下觀察發(fā)現(xiàn)K562細(xì)胞體積變大，核染色質(zhì)濃集變粗，核漿比例變少，有核切跡，細(xì)胞質(zhì)增多，核周胞質(zhì)出現(xiàn)淡染區(qū)，表明K562細(xì)胞發(fā)生了一定程度的分化;MEG-01細(xì)胞則表現(xiàn)為體積變大，核染色質(zhì)濃集變粗，核漿比例變少，細(xì)胞核不規(guī)則，胞質(zhì)增多，核周胞質(zhì)出現(xiàn)淡染區(qū)，表明MEG-01細(xì)胞發(fā)生了一定程度的分化。流式細(xì)胞儀分析顯示:終濃度為10-6 mol/L

4、的氨基甾體類衍生物分別作用于K562細(xì)胞和MEG-01細(xì)胞第3d，K562細(xì)胞膜上CD71表面標(biāo)記及MEG-01細(xì)胞膜上CD41表面標(biāo)記表達(dá)陽性率均升高。real-time RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:終濃度為10-6 mol/L的氨基甾體類衍生物作用于MEG-01細(xì)胞第3d，提取其RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增，與對照組相比，細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道TRPC1基因mRNA表達(dá)顯著下調(diào);MEG-01細(xì)胞重組蛋白酪氨酸磷酸酯酶非受體1型PTPN1基因mRN

5、A表達(dá)顯著上調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.氨基甾體類衍生物可以有效地抑制K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞的增殖，抑制效果呈一定的濃度依賴性。
　　2.氨基甾體類衍生物能誘導(dǎo)K562細(xì)胞系向紅系分化，誘導(dǎo)MEG-01細(xì)胞向巨核系分化。
　　3.氨基甾體類衍生物能顯著下調(diào)MEG-01細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道TRPC1基因mRNA表達(dá)。
　　4.氨基甾體類衍生物能上調(diào)MEG-01細(xì)胞重組蛋白酪氨酸磷酸酯酶非受體1型PTPN1基