腸球菌毒力基因和萬古霉素耐藥基因研究.pdf

1、目的：
　　 1.了解溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院2007年至2011年5年間臨床分離屎腸球菌和糞腸球菌的標本類型分布情況及其對各種抗菌藥物的耐藥性。
　　 2.統(tǒng)計分析各種標本來源腸球菌之間毒力基因攜帶率的差異，為進一步研究腸球菌致病機制和毒力基因作用機制奠定基礎。
　　 3.了解耐萬古霉素腸球菌耐藥基因特點及表型特點，并對其水平傳播特性進行研究。
　　 4.對耐萬古霉素腸球菌進行流行病學調查研究。
　

2、　 方法：
　　 1.回顧性調查2007年至2011年臨床分離的屎腸球菌和糞腸球菌的標本來源分布情況，統(tǒng)計分析兩種腸球菌對各種抗菌藥物的耐藥情況。
　　 2.PCR的方法篩查腸球菌毒力因子基因，并與菌株來源結合進行統(tǒng)計學方差分析，找出二者對應聯(lián)系。
　　 3.用PCR的方法對腸球菌進行基因篩查，檢測萬古霉素耐藥相關基因vanA、vanB、vanC1/C2、vanM和毒力因子基因(esp、cyl、hyl、gel)

3、。通過接合轉移試驗觀察耐藥基因的水平轉移能力，檢測接合子的最低抑菌濃度，同時用PCR的方法驗證結合實驗是否成功。
　　 4.用脈沖場凝膠電泳(PFGE)和多位點序列分型(MLST)方法對耐萬古霉素的腸球菌進行同源性分析，了解其流行病學特點。
　　 結果：
　　 1.618株腸球菌（包括屎腸球菌360株和糞腸球菌258株）分離自溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院臨床送檢的各類標本，其中來自尿液標本198株(占32.0％)，痰液

4、標本165株（占26.7％），糞便標本115株（占18.6％），引流液、創(chuàng)面、膿液、血液等標本140株（占22.7％）。藥敏結果顯示:屎腸球菌對青霉素G、氨芐青霉素、左氧氟沙星和莫西沙星耐藥率均達在90％以上;其對呋喃妥因、莫西沙星、青霉素G、氨芐青霉素、氨基糖苷類和喹諾酮類藥物的耐藥率都要明顯高于糞腸球菌;屎腸球菌和糞腸球菌對利奈唑胺、萬古霉素和替考拉寧，二者敏感率都在90％以上。
　　 2.分離自尿液標本的菌株esp、gel

5、E和cyl三種毒力基因的攜帶率要高于糞便標本來源的菌株，分離自痰液標本菌株cyl攜帶率也高于糞便標本來源菌株，而分離自尿液標本的菌株gelE攜帶率高于痰液標本來源菌株， hyl基因在不同標本來源的菌株中檢出率無明顯差異。
　　 3.618株腸球菌中共檢出VRE15株，其中14株為屎腸球菌。所有VRE對臨床常用抗菌藥物大部分表現(xiàn)為耐藥。對糖肽類藥物萬古霉素呈高水平耐藥（MIC≥256μg/ml），對替考拉寧有2株表現(xiàn)為敏感，其余耐

6、藥;VRE菌株中大部分都對氨芐西林、青霉素G、替考拉寧、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星耐藥;對四環(huán)素耐藥存在異質性;所有菌株對利奈唑胺敏感。
　　 4.對15株萬古霉素耐藥的vanA型菌株進行液體接合轉移試驗，接合試驗全陰性，未獲得陽性接合子。
　　 5.對vanA基因陽性屎腸球菌進行PFGE同源性分析并繪制各菌株間的相似性樹狀圖，少數(shù)菌株存在同源性，多位點序列分型(MLST)也證實少數(shù)菌株親緣關系相近。
　　 結論：

7、r>　　 1.臨床分離的腸球菌主要來源于泌尿道和呼吸道標本。屎腸球菌和糞腸球菌對臨床常用抗菌藥物的耐藥性存在差異。
　　 2.毒力因子基因在不同標本來源的腸球菌中攜帶率不同，尿液標本中分離的菌株毒力因子基因攜帶率高于糞便來源的菌株。四種毒力因子基因中esp基因攜帶率最高。
　　 3.耐萬古霉素腸球菌主要為屎腸球菌，多為多重耐藥菌株，均為vanA基因型，攜帶至少一種毒力基因。
　　 4.MLST分型和脈沖場凝膠電