動物源和水源腸球菌萬古霉素耐藥表型、基因型檢測及同源性研究.pdf

1、目的：調(diào)查動物源(寵物醫(yī)院、雞場、豬場)、水源(閩江、小區(qū)池塘、學校魚塘、污水溝、下水道)耐萬古霉素腸球菌(Vancomycin resistant enterococcus VRE)的分離率，并對分離出的耐萬古霉素腸球菌進行耐藥表型、基因型檢測及同源性研究，為指導獸醫(yī)臨床合理用藥及控制VRE向人類的傳播提供依據(jù)。 方法：采用瓊脂平板篩選法(ADSP法)分離耐萬古霉素腸球菌；根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)推薦的方法，以

2、微量肉湯稀釋法對分離出的30株動物源及17株水源耐萬古霉素腸球菌進行常用6種抗菌藥物的敏感性檢測；用多重PCR的方法同時進行耐藥基因及腸球菌種水平的鑒定；用基因外重復回文序列-PCR(Repetitive extragenic palindromic elements-PCR)對篩選出的動物源、水源耐萬古霉素腸球菌進行分子分型及同源性分析。 結(jié)果： (1)從2個寵物醫(yī)院、3個規(guī)?；i場及1個規(guī)?；u場共420個樣本，篩選

3、出30株耐萬古霉素腸球菌；從閩江、生活小區(qū)池塘、學校魚塘、污水溝、下水道共200個樣本，篩選出17株耐萬古霉素腸球菌；不同豬場不同豬群的分離率以哺乳小豬最高，其次為保育小豬，不同水源的分離率以下水道最高，其次為污水溝；藥敏實驗結(jié)果顯示，動物源、水源耐萬古霉素腸球菌均以土霉素的耐藥率最高，分別為93.3％和90％，均以氨芐西林的敏感率最高，分別為80％和88.2％。 (2)PCR檢測萬古霉素耐藥基因，30株動物源耐萬古霉素腸球菌中

4、2株為VanA陽性，12株VanB陽性，7株VanC1陽性，5株VanC2/3陽性，4株未擴增出Van基因；17株水源耐萬古霉素腸球菌中3株VanB陽性，9株VanC1陽性，5株VanC2/3陽性，未擴增出VanA基因。 (3)REP-PCR結(jié)果顯示，30株動物源耐萬古霉素腸球菌共分為13個型，用A-M表示。A型分為A1-A6亞型，F(xiàn)型分為F1-F3亞型，J型分為J1-J3亞型，B、C、D、E、G、H、I、K、L、M沒有亞型。親

5、緣性分析，27、28、29號菌株具有100％的同源性，21和22、1和7、4和9、17和18、11和14、6和8等菌株間各自具有100％的同源性。17株水源VIE被擴增出3-9條帶，大小在200bp-2000bp之間，共分為5個型，用A-E表示。A型分為A1-A3亞型，B、C、D、E沒有亞型。5種基因型以A1型為主。A1型有6株，A2型有1株，A3型有2株，B型有3株，D型3株，C、E型各一株。9、10、11、14、16與17號，5、1

6、2與13號，3、4與7號，1與15號，均各自有100％的同源性。 結(jié)論： (1)動物源、水源均能分離出耐萬古霉素腸球菌，所分離的耐萬古霉素腸球菌對土霉素的耐藥率最高，對氨芐西林的敏感率最高，VanA基因介導高水平耐藥，VanC1、VanC2/3介導低水平耐藥，耐藥表型與基因型一致。 (2)同源性分析顯示，同一豬場分離的耐萬古霉素腸球菌具有較高的同源性，污水溝、下水道分離的水源耐萬古霉素腸球具有較高的同源性。在動物