異質(zhì)性萬(wàn)古霉素中介的金黃色葡萄球菌的篩選及耐藥機(jī)制初步研究.pdf

1、目的:研究解放軍總醫(yī)院臨床分離130株MRSA的耐藥情況，從中篩選hVISA，初步探討hVISA的耐藥機(jī)制。
　　方法:收集2008年1月-2009年12月130株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，采用微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法進(jìn)行含多種新型抗菌藥物在內(nèi)的體外藥敏試驗(yàn)，使用BHIT5(含替考拉寧5μ g/ml的腦心浸液瓊脂)、BHIV6(含萬(wàn)古霉素6μ g/ml的腦心浸液瓊脂)和Macrodilution Etests法(宏量Etests

2、法)對(duì)130株MRSA進(jìn)行hVISA篩選并使用改良PAP-AUC(菌群分析策略)法進(jìn)行確認(rèn)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)探討質(zhì)控菌株N315與hVISA細(xì)胞壁合成相關(guān)基因的表達(dá)情況，利用PCR技術(shù)了解細(xì)胞壁相關(guān)基因的突變情況，利用透射電鏡觀察N315與hVISA細(xì)胞壁厚度，采用Graphpad Prism軟件對(duì)兩組間細(xì)胞壁相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量與細(xì)胞壁厚度之間的差異進(jìn)行t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:130株MRSA對(duì)抗MRSA一線用藥糖肽類(lèi)抗生素

3、萬(wàn)古霉素及替考拉寧均100％敏感，但部分MRSA在萬(wàn)古霉素敏感范圍內(nèi)出現(xiàn)高的MIC，萬(wàn)古霉素MIC在1到2μg/ml總菌株數(shù)已達(dá)46株，占35.4％，對(duì)多種新一代抗菌藥物如達(dá)托霉素、利奈唑胺、替加環(huán)素全部敏感。130株MRSA中發(fā)現(xiàn)1株hVISA。MRSA細(xì)胞壁相關(guān)基因graF、graR在N315與hVISA兩株菌間相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯差異，細(xì)胞壁相關(guān)基因glms、PBP4、vraS、vraR、murZ、sgtB、dlt在hVISA中較N3

4、15表達(dá)上調(diào)，相對(duì)表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。hVISA的vraS基因發(fā)生突變，第44位G替換了T，引起編碼的氨基酸發(fā)生改變，甘氨酸替換了纈氨酸。hVISA(36.72±1.04nm)的細(xì)胞壁較N315(28.15±1.25nm)明顯增厚，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:130株MRSA雖對(duì)萬(wàn)古霉素全部敏感，但部分MRSA在萬(wàn)古霉素敏感范圍內(nèi)出現(xiàn)高的MIC，萬(wàn)古霉素MIC在1到2μ g/ml總菌株數(shù)已