2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  隨著耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)感染率的上升和萬古霉素作為治療首選藥物的大量使用,臨床上出現(xiàn)了萬古霉素敏感性降低甚至完全耐藥的金黃色葡萄球菌,由此而引起的萬古霉素治療失敗的病例也逐漸增加。臨床分離萬古霉素敏感性降低的金黃色葡萄球菌報(bào)道的也越來越頻繁,萬古霉素敏感性降低的金黃色葡萄球菌包括異質(zhì)性萬古霉素中介金黃色葡萄球菌(heterogeneousvancomycin-intermediate Staphyloc

2、occus aureus,hVISA)和萬古霉素中介金黃色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus,VISA)。
  目前,大多數(shù)的研究都是關(guān)于hVISA/VISA的表型變化,但對(duì)于不同表型變化的分子機(jī)制研究不夠深入。我們應(yīng)用多步體外萬古霉素誘導(dǎo)臨床菌株,模擬臨床治療增加萬古霉素治療的用量,得到萬古霉素最低抑菌濃度(MIC)升高的耐萬古霉素菌株。此外,我們通過比較萬古霉素

3、誘導(dǎo)后的菌株與其臨床原始菌株表型及其調(diào)控基因的表達(dá)情況,進(jìn)一步了解hVISA/VISA萬古霉素耐藥的分子機(jī)制。
  方法:
  1、實(shí)驗(yàn)菌株選取:收集2007-2011年間中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院的非重復(fù)金黃色葡萄球菌757株,經(jīng)由BHIA-3V篩選法,PAP-AUC方法確認(rèn)的20株VSSA、76株hVISA和4株VISA。根據(jù)MICvAN值,選擇了4株代表性菌株。
  2、萬古霉素體外誘導(dǎo)V

4、SSA和hVISA/VISA:利用萬古霉素濃度遞增連續(xù)培養(yǎng)的方法對(duì)VSSA和hVISA/VISA進(jìn)行體外誘導(dǎo)。并通過脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)和分子分型檢測(cè)VSSA和hVISA/VISA原始株與誘導(dǎo)株的同源性。
  3、體外藥敏實(shí)驗(yàn):微量肉湯稀釋法分別檢測(cè)萬古霉素對(duì)VSSA和hVISA/VISA原始株和誘導(dǎo)株的最小抑菌濃度(MIC)。
  4、菌群譜型分析-曲線下面積(PAP-AUG)驗(yàn)證試驗(yàn):檢測(cè)VSSA和hVISA/VI

5、SA原始株和誘導(dǎo)株內(nèi)的耐藥子菌群數(shù)量。
  5、表型特征研究:通過檢測(cè)細(xì)菌細(xì)胞壁厚度、δ-溶血表達(dá)、自溶活性和生物膜形成,研究VSSA和hVISA/VISA原始株和誘導(dǎo)株的表型特征。
  6、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)VSSA和hVISA/VISA原始株和誘導(dǎo)株agr功能相關(guān)基因RNAⅢ,自溶活性相關(guān)基因atl和lytM,生物膜形成相關(guān)基因icaA和icaR的轉(zhuǎn)錄水平,并通過2-ΔΔCt方法進(jìn)行相對(duì)定量。分析以上幾種基因的轉(zhuǎn)

6、錄水平與表型特征的相關(guān)性。
  結(jié)果:
  1、VSSA和hVISA/VISA經(jīng)過萬古霉素體外誘導(dǎo)培養(yǎng)45-60天,11、143、187和18分別能在萬古霉素濃度為8μg/ml、11μg/ml、14μg/ml、16μg/ml的BHI平皿上穩(wěn)定生長(zhǎng)。
  2、PFGE檢測(cè)VSSA和hVISA/VISA原始株與誘導(dǎo)株具有相同電泳條帶,具有同源性;原始株與誘導(dǎo)株分子分型一致。
  3、VSSA和hVISA/VISA誘導(dǎo)

7、株萬古霉素MIC較各自原始株明顯增高;誘導(dǎo)株耐藥子菌群較各自原始株也明顯增加。
  4、VSSA和hVISA/VISA原始株與誘導(dǎo)株的表型特征:與原始株相比,誘導(dǎo)株細(xì)胞壁顯著增厚,自溶活性下降,生物膜形成能力減弱。除VSSA原始株11的δ-溶血表達(dá)為陽性,其余hVISA/VISA原始株與誘導(dǎo)株的δ-溶血表達(dá)均為陰性。
  5、與VSSA和hVISA/VISA原始株相比,各誘導(dǎo)株agr功能相關(guān)基因RNAⅢ表達(dá)下降,自溶活性相關(guān)

8、基因atl和lytM表達(dá)下降,生物膜形成相關(guān)基因icaA和icaR表達(dá)下降。
  結(jié)論:
  1、VSSA經(jīng)萬古霉素體外可誘導(dǎo)VISA,臨床不合理用藥可引起萬古霉素低水平耐藥。
  2、hVISA/VISA萬古霉素體外誘導(dǎo)不易至完全耐藥,在萬古霉素暴露一段時(shí)間內(nèi),hVISA/VISA中耐藥子菌群數(shù)量劇增,萬古霉素MIC有所增加,萬古霉素耐藥與hVISA/VISA生長(zhǎng)環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)條件密切相關(guān)。
  3、與VSSA和

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