動(dòng)物源性大腸桿菌主要耐藥基因的克隆及其同源性研究.pdf

1、抗生素在大腸桿菌病預(yù)防及治療方面有著不可替代的作用，但是隨著抗生素的不恰當(dāng)使用，由耐藥菌株引起的人及動(dòng)物感染性疾病不斷增加，大腸桿菌耐藥及多重耐藥現(xiàn)象已十分嚴(yán)重。 為檢測(cè)大腸桿菌的耐藥水平，為大腸桿菌耐藥基因檢測(cè)芯片的研制提供陽(yáng)性樣本，解決大腸桿菌耐藥性快速檢測(cè)問(wèn)題，我們從吉林省長(zhǎng)春、通化、白城、梅河、延邊和四平采集的疑似大腸桿菌病致死的雞源、豬源、犬源和貓?jiān)床×蠘颖?6份。對(duì)采集樣本進(jìn)行分離、鑒定，獲得大腸桿菌62株。

2、 采用平皿二倍稀釋法對(duì)隨機(jī)選取的20株大腸桿菌進(jìn)行了針對(duì)諾氟沙星、慶大霉素、復(fù)方新諾明、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考五種代表性藥物的耐藥性檢測(cè)。受檢大腸桿菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物均耐藥，其中高度耐藥菌株6株；對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物耐藥菌株19株，其中高度耐藥菌株12株；對(duì)磺胺類(lèi)藥物耐藥菌株20株，全部表現(xiàn)為高度耐藥；對(duì)四環(huán)素類(lèi)藥物耐藥菌株14株，其中高度耐藥菌株11株；對(duì)氯霉素類(lèi)藥物耐藥菌株l株。其中，對(duì)3種抗菌藥物耐藥的大腸桿菌為5株，占受檢菌株的25％；對(duì)

3、4種抗菌藥物耐藥的大腸桿菌為13株，占受檢菌株的65％；對(duì)5種抗菌藥物耐藥的大腸桿菌為1株，占受檢菌株的5％。監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，當(dāng)前大腸桿菌耐藥特點(diǎn)表現(xiàn)為高度耐藥、多重交叉耐藥。 針對(duì)大腸桿菌主要耐藥性基因GyrA、GyrB、ParC、AacC4、Sul2和TetA設(shè)計(jì)相應(yīng)的特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測(cè)序，應(yīng)用Clustalxl.83軟件、MEGA3.1軟件對(duì)測(cè)得序列分析。大腸桿菌5號(hào)菌株GyrA基因83位

4、Ser突變?yōu)長(zhǎng)eu，87位Asp突變?yōu)锳sn；其ParC基因80 Ser位突變?yōu)镮le；NCBI-BLAST檢索，PCR擴(kuò)增片段與大腸桿菌同源性達(dá)98％以上；表明5號(hào)菌株GyrA基因可為大腸桿菌對(duì)喹諾酮類(lèi)耐藥基因檢測(cè)芯片所用陽(yáng)性樣本的制備提供參考。大腸桿菌078<'R>號(hào)菌株攜帶的AacC4基因，9號(hào)菌株、14號(hào)菌株、JX<'11>號(hào)菌株攜帶的Sul2基因和E<,1>R號(hào)菌株攜帶的TetA基因，分別可為制備大腸桿菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物、磺胺

5、類(lèi)藥物和四環(huán)素類(lèi)藥物耐藥基因檢測(cè)芯片提供陽(yáng)性樣本。 對(duì)臨床分離大腸桿菌耐藥基因的序列分析結(jié)果還表明，大腸桿菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物高度耐藥的078<'R>號(hào)菌株GyrA基因的83位氨基酸發(fā)生突變、104位Asp被Gly取代、181位Asn被Asp取代，但87位氨基酸未發(fā)生突變；大腸桿菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物低度耐藥的8號(hào)菌株GyrA基因只發(fā)生一個(gè)氨基酸突變時(shí)，ParC基因也發(fā)生突變(80Ser→Ile)；上述兩種耐藥基因的突變特點(diǎn)未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)