流感嗜血桿菌的耐藥性及同源性研究.pdf

1、背景：
　　流感嗜血桿菌是呼吸道的定植菌。近年來由于抗菌藥物的廣泛使用,流感嗜血桿菌作為條件致病菌引起的感染率持續(xù)增加,特別是在有病毒感染、外界侵入性操作、使用免疫抑制劑等造成機(jī)體免疫力低下的老年人和兒童中易于引起嚴(yán)重感染,如腦膜炎、菌血癥、社區(qū)獲得性肺炎、急性中耳炎、急性鼻竇炎等。在社區(qū)獲得性肺炎中流感嗜血桿菌是僅次于肺炎鏈球菌的常見病原菌。氨芐西林和環(huán)丙沙星是呼吸道感染的最常用的經(jīng)驗(yàn)藥物。世界各地對流感嗜血桿菌的耐藥監(jiān)測中,氨

2、芐西林和復(fù)方新諾明耐藥率不斷上升,且地區(qū)差異較大。β-內(nèi)酰胺酶陰性氨芐西林耐藥流感嗜血桿菌的檢出率也在上升。近年國內(nèi)也有對喹諾酮耐藥流感嗜血桿菌的報(bào)道,已引起人們的廣泛重視。
　　目前,流感嗜血桿菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機(jī)制主要有:產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。常見的β-內(nèi)酰胺酶有TEM-1和ROB-1型,其中最常見的是TEM-1型。青霉素結(jié)合蛋白改變是β-內(nèi)酰胺酶陰性氨芐西林耐藥的機(jī)制。流感嗜血桿菌對喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制主要是喹諾酮耐

3、藥決定區(qū)的突變導(dǎo)致細(xì)菌耐藥。Gyr基因編碼的DNA促旋轉(zhuǎn)酶和par基因編碼的Ⅳ型拓?fù)洚悩?gòu)酶是氟喹諾酮類藥物作用的靶位,在核酸復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中起非常重要的作用。該區(qū)域基因的突變抑制了細(xì)菌的DNA復(fù)制過程,導(dǎo)致細(xì)菌死亡。
　　分子生物學(xué)分型有腸桿菌科基因間重復(fù)序列(ERIC-PCR)、脈沖場凝膠電泳(PFGE)等多種方法,通過分析細(xì)菌基因組DNA,從遺傳進(jìn)化的角度鑒定菌株的同源性。PFGE具有分辨率強(qiáng)、重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn),是分子生物分型的

4、金標(biāo)準(zhǔn),對于病原菌監(jiān)測、追蹤傳染源、找尋傳播途徑等有著非常重要的意義,是監(jiān)測、控制細(xì)菌的傳播流行的理想工具。
　　目的：
　　了解本地區(qū)流感嗜血桿菌的分布及耐藥情況,了解流感嗜血桿菌對臨床常用抗菌藥物的耐藥基因型及分子流行病學(xué)規(guī)律,為臨床抗感染治療提供依據(jù),指導(dǎo)臨床合理用藥。
　　方法：
　　采用k-B紙片法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn),結(jié)果判斷參照2010年臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI20)標(biāo)準(zhǔn)。頭孢硝噻吩玻片法測定β-

5、內(nèi)酰胺酶。采用PCR擴(kuò)增TEM及ROB型β-內(nèi)酰胺酶基因和喹諾酮耐藥決定區(qū)基因gyrA、gyrB、parC、和parE及4種質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr。脈沖場凝膠電泳分析菌株同源性。應(yīng)用WHONET5.4軟件分析52株流感嗜血桿菌的分布情況和藥敏結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　從2010年1月到2011年7月,共檢出52株流感嗜血桿菌,其中42株來自臨床送檢呼吸道標(biāo)本,10株來自

6、門診患者。年齡39~85(66±4.9)歲。臨床分離流感嗜血桿菌科室分布以呼吸內(nèi)科為主28例(53.85％),門診10例(19.23%),其他科室14例(26.92%)。流感嗜血桿菌對氨芐西林耐藥率19.23%,對復(fù)方新諾明的耐藥率為65.38%,氨曲南和阿莫西林/克拉維酸鉀耐藥率11.54%。對二、三、四代頭孢、氨芐西林/舒巴坦、阿奇霉素、氯霉毒敏感率在90%以上,亞胺培南和哌拉西林/三唑巴坦敏感率100%。10株氨芐西林耐藥菌株均產(chǎn)

7、β-內(nèi)酰胺酶,產(chǎn)酶率為19.23%。
　　PCR基因擴(kuò)增及測序結(jié)果:10株產(chǎn)酶株均擴(kuò)增出TEM基因,與GenBank進(jìn)行Blast比對皆為TEM-1型。10株產(chǎn)酶株均未擴(kuò)增出ROB基因。收集到2株流感嗜血桿菌對環(huán)丙沙星耐藥,均擴(kuò)增出gyrA、gyrB、parC和parE基因產(chǎn)物,未擴(kuò)增出質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr。2株環(huán)丙沙星耐藥株同時(shí)產(chǎn)生gyrA基因84位絲氨酸突變?yōu)楸奖彼岷?8

8、位天冬氨酸突變?yōu)槔野彼岷?株parC基因84位絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?1株parC基因未發(fā)生突變。
　　52株流感嗜血桿菌經(jīng)脈沖場凝膠電泳后得到51種帶型,其中有2株僅有一條帶的差別。
　　結(jié)論：
　　本地區(qū)流感嗜血桿菌除對氨芐西林和復(fù)方新諾明耐藥率較高以外,對其余臨床常用的抗生素仍保持較好的敏感性。流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥機(jī)制為產(chǎn)TEM-1型β-內(nèi)酰胺酶。本地區(qū)流感嗜血桿菌對喹諾酮耐藥可能與gyrA和parC基因突