穿心蓮內(nèi)酯抗腫瘤作用及靶向NF-κB信號(hào)的分子機(jī)制研究.pdf

1、穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide,Andro)是爵床科穿心蓮屬植物(Andrographis paniculata (Burm.f.)Nees)穿心蓮提取物中的主要有效成分之一。作為天然植物藥穿心蓮在亞洲及南美一些國(guó)家用于炎癥的治療已經(jīng)有上千年的歷史，近來在對(duì)炎癥的研究中，已有文獻(xiàn)報(bào)道，Andro可以通過與NF-κB p50亞基的62位還原態(tài)半胱氨酸共價(jià)結(jié)合使其不能在細(xì)胞核內(nèi)與DNA結(jié)合而起到阻抑NF-κB信號(hào)激活的作用。近年

2、來的研究還表明，在多種腫瘤細(xì)胞中，NF-κB啟動(dòng)后，腫瘤相關(guān)因子如Bcl-Xl,c-FLIP,VEGF,MMP9等會(huì)高表達(dá)，使正常細(xì)胞的“凋亡的腫瘤監(jiān)視功能”失調(diào)，并通過抗凋亡，促新生血管生成及促進(jìn)浸潤(rùn)等過程而起到促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用(17)。因此在腫瘤中NF-κB信號(hào)發(fā)揮著促進(jìn)增殖、抑制凋亡而起著抗腫瘤的作用。而炎癥與腫瘤有著密切的關(guān)系，那么 Andro在炎癥中是通過NF-κB起作用的，NF-κB又在腫瘤中起著重要的作用，那么And

3、ro在腫瘤中的作用是否也與NF-κB信號(hào)有關(guān)呢？但Andro是否能夠靶向NF-κB信號(hào)發(fā)揮抗腫瘤作用的研究目前尚未見報(bào)道。本課題采用基因工程小鼠(Rip1-tag2鼠)的自發(fā)胰腺瘤和B16黑色素皮下移植瘤為腫瘤研究模型，Andro腹腔治療和已上市Andro滴丸的灌胃治療為治療方式，以及構(gòu)建B16/p50siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株和B16/IκBα的穩(wěn)定細(xì)胞株，檢測(cè)細(xì)胞株的體內(nèi)成瘤情況，研究Andro是否對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有抑制作用，以及A

4、ndro對(duì)腫瘤的抑制是否靶向NF-κB信號(hào)通路而發(fā)揮作用的。
　　 方法：
　　 1.Andro對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的作用建立Rip1-Tag2小鼠的胰島β細(xì)胞瘤自發(fā)生長(zhǎng)模型。Andro治療(腹腔治療5ug/g)為實(shí)驗(yàn)組，而無效對(duì)照藥物4H-andro治療(腹腔治療5ug/g)為對(duì)照組通過計(jì)數(shù)血性胰島、胰島β細(xì)胞瘤數(shù)目，以及測(cè)量腫瘤的體積，探討Andro在自發(fā)腫瘤中的作用。并用免疫組化技術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中與腫瘤增殖、凋亡相關(guān)的標(biāo)記性

5、分子如Brdu、Tunel等，分析Andro對(duì)腫瘤增殖、凋亡的影響。
　　 采用C57小鼠，皮下接種B16黑色素瘤細(xì)胞，建立皮下移植瘤模型，用Andro治療(腹腔治療5ug/g)和對(duì)照藥物4H-andro(腹腔治療5ug/g)治療，通過測(cè)量腫瘤體積和免疫組化技術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中與腫瘤增殖、凋亡相關(guān)的標(biāo)記性分子如Brdu、Tunel等，分析Andro對(duì)腫瘤增殖、凋亡的影響。
　　 2.Andro滴丸對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的作用采用C57

6、小鼠，皮下接種B16黑色素瘤細(xì)胞，建立皮下移植瘤模型，用Andro滴丸治療(灌胃治療0.143ug/20g)和對(duì)照藥物4H-andro(灌胃治療0.143ug/20g)治療，通過腫瘤體積、小鼠生存率、腫瘤重量，分析Andro滴丸對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響。
　　 3.Andro對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用給C57小鼠尾靜脈注射B16黑色素瘤細(xì)胞，建立轉(zhuǎn)移瘤模型，用Andro治療(腹腔治療5ug/g)和對(duì)照藥物4H-andro(腹腔治療5ug/g)

7、治療通過記錄轉(zhuǎn)移到肺的腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目，觀察Andro對(duì)皮下移植瘤肺轉(zhuǎn)移的作用。
　　 4.Andro對(duì)B16黑色素瘤細(xì)胞中NF-κB信號(hào)的作用利用B16黑色素瘤細(xì)胞系，構(gòu)建B16/p50siRNA和B16/IκBα的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，分別用Andro(30umol)做為實(shí)驗(yàn)組，4H-andro(30umol)為對(duì)照組，檢測(cè)細(xì)胞增殖的作用和觀察不同細(xì)胞株在體內(nèi)成瘤的的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.建立的Rip1-Tag2

8、小鼠的胰島β細(xì)胞瘤自發(fā)生長(zhǎng)模型和皮下移植瘤模型，Andro治療的小鼠的腫瘤體積和腫瘤數(shù)目明顯小于4H-andro處理的。且免疫組化結(jié)果顯示Andro處理的腫瘤組織細(xì)胞中Brdu增殖數(shù)目明顯少于4H-andro處理的，同時(shí)凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多。
　　 2.Andro滴丸處理的皮下植瘤模型結(jié)果顯示Andro治療的小鼠腫瘤體積和腫瘤重量明顯小于4H-andro處理的，生存期也明顯延長(zhǎng)。
　　 3.皮下移植瘤肺轉(zhuǎn)移瘤模型結(jié)果表明A