PPV SC-1株VP2蛋白Cys-402、214的定點突變及其對PPV VLPs影響的初步研究.pdf

1、本研究以PPVVP2為基礎，通過定點突變的方法研究了Cys在VLPs高級結構和免疫原性中的作用，旨在尋找利于外源基因插入的位點，為以PPVVLPs為基礎的多價疫苗和抗原轉運系統(tǒng)的研究提供理論基礎。方法：根據GenBank中PPVVP2(Genbank登錄號：D00623)序列設計并合成突變引物和克隆引物，利用重疊延伸PCR技術分別將PPVVP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突變?yōu)榫彼帷⒌玫降耐蛔儺a物VP2(A)和V

2、P2(B)分別插入真核表達載體pPI-2.EGFP中，構建含有突變產物和報告基因EGFP的真核表達質粒pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)。將重組質粒轉染COS-7細胞，研究突變對PPVVLPs形成的影響。同時將重組質粒分別免疫Balb/c小白鼠，監(jiān)測外周血中T淋巴細胞及血清中PPV抗體的動態(tài)變化，探討突變對PPVVLPs免疫原性的影響。 通過電鏡技術對表達產物進行觀察，結果只在轉染質粒pPI-

3、2.EGFP.VP2(A)的細胞中見到許多VLPs，證明Cys-214對VLPs的形成至關重要，而Cys-402的突變不會影響VLPs的包裝；在免疫小白鼠外周血T淋巴細胞的監(jiān)測和血清中特異性抗體的檢測中發(fā)現(xiàn)，質粒pPI-2.EGFP.VP2(B)的免疫效果明顯低于pPI-2.EGFP.VP2(A)，并且僅在免疫了質粒pPI-2.EGFP.VP2(A)的小白鼠血清中檢測到較高水平的PPV特異性抗體，說明Cys-402的突變不僅不影響VLP