雄激素受體基因及鈣蛋白酶10基因多態(tài)性與老年男性代謝綜合征的相關性研究.pdf

1、代謝綜合征(Metabolic Syndrome，MS)是一組復雜的代謝紊亂癥候群，其紐分包括血糖異常、脂代謝紊亂、高血壓、肥胖等代謝異常。隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，代謝綜合征的發(fā)生率隨年齡增長而增加。估計全球大約有四分之一的成年人患有代謝綜合征，其死于心臟病或中風的風險是無代謝綜合征人群的2倍，而且代謝綜合征人群發(fā)生2型糖尿病的風險升高5倍。 隨著對代謝綜合征研究的深入，近年來有關雄激素在男性代謝綜合征發(fā)病中的作用日益受到關注。有研

2、究顯示，老年男性代謝綜合征患者存在低水平的脫氫表雄酮(DHEAS)、總睪酮(TT)、性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)、游離睪酮(FT)和雄激素受體(androgen receptor，AR)。多數(shù)流行病學資料顯示低水平的睪酮是男性代謝綜合征和糖尿病的危險因素。已有文獻報道較低的總睪酮、游離睪酮和性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)濃度與代謝綜合征強烈相關。雄激素通過雄激素受體發(fā)揮生理作用。雄激素受體基因第一外顯區(qū)存在CAG重復多態(tài)性，目前研究認為A

3、R的表達與功能可能受AR基因CAG重復序列微調(diào)控。本研究旨在通過AR基因多態(tài)性-AR表達水平-代謝綜合征三個環(huán)節(jié)來觀察AR基因多態(tài)性對AR表達的調(diào)控作用及其與老年男性代謝綜合征的關系，為代謝綜合征的防治提供一定的理論依據(jù)。 鈣蛋白酶10(Calpain10，CAPN10)基因是第一個被定位克隆的糖尿病易感基因。有研究表明CAPN10-SNP43G/G基因型個體較G/A，A/A個體更易患糖尿病，且G/G純合子較G/A，A/A．有更

4、高的收縮壓和甘油三酯水平。有學者報道CAPN10-SNP43G/G與中心性肥胖或胰島素抵抗相關。由此推斷在發(fā)病機制上，CAPN10基因多態(tài)性和代謝綜合征密切相關，CAPN10基因可能也是代謝綜合征的易感基因。 研究目的: (1)構(gòu)建AR基因CAG重復數(shù)為0、21、33的表達載體(包括完整的AR編碼序列和5’-UTR及部分3'-UTR，已證實5'-UTR和3'-UTR為轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū))，轉(zhuǎn)染人胚腎HEK293細胞，觀察CAG重

5、復序列多態(tài)性對AR的轉(zhuǎn)錄活性、表達水平的影響。 (2)探討AR基因第一外顯子區(qū)CAG重復多態(tài)性與老年男性代謝綜合征的關系。 (3)觀察CAPN10-SNP43G/A等位基因多態(tài)性的分布情況，并探討其與老年男性代謝綜合征的關系。 研究對象: 從北京萬壽路地區(qū)流行病學調(diào)查資料數(shù)據(jù)庫中篩選老年男性(＞60歲)312例。代謝綜合征患者119例，年齡60-83，平均68.97±5.39。非代謝綜合征193例，其中一

6、種代謝紊亂組89例，年齡60-82，平均年齡68.06±4.82；兩種代謝紊亂組合組51例，年齡60-81，平均年齡68.29±5.35；無代謝紊亂組53例，年齡60-85，平均68.43±5.21。以上入選者均為久居北京的漢族人。 代謝綜合征患者按2005年國際糖尿病聯(lián)盟IDF關于代謝綜合征的診斷標準進行篩選。 研究方法: 實驗方法一、AR基因CAG重復數(shù)為0、21、33的表達載體的構(gòu)建 以AR基因CA

7、G重復數(shù)為0、21、33基因組DNA為模板，通過重組PCR反應對目的基因進行擴增和拼接，并將其克隆至pwtAR-IRES2-EGFP表達載體。 實驗方法二、AR基因在真核細胞HEK293細胞中的表達 將CAG重復數(shù)為0、21、33的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胚腎HEK293細胞，用RT-PCR和Western blot檢測AR基因的表達情況。 實驗方法三、CAPN10基因多態(tài)性的檢測 用酚/氯仿抽提核酸法提取研究對象

8、外周血白細胞的基因組 DNA，以DNA為模板，用擴增阻滯突變系統(tǒng)聚合酶鏈反應擴增170bp的目的片段，通過PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖譜進行CAPN10-SNP43G/A基因型判定。 研究結(jié)果: (1)成功構(gòu)建AR基因CAG重復數(shù)為0、21、33的表達載體，酶切及測序鑒定正確。 (2)CAG重復數(shù)目與AR mRNA和AR蛋白表達水平之間的關系：在 ARmRNA水平，CAG0最高，CAG33次之，CAG21最低。三者比較差

9、別不顯著；在AR蛋白水平，三者比較有統(tǒng)計學意義，CAG0表達最高，而CAG21同CAG33的表達量比較差別不大。 (3)四組研究對象的臨床特點：隨著代謝紊亂成分的增加，體重、BMI、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓、甘油三酯、空腹血糖指標增加，高密度脂蛋白指標降低，MS組與其他組比較，差異更為顯著。 (4)代謝綜合征組AR基因CAG重復范圍為10-33，平均22.82±3.58，中位數(shù)為23；一種代謝紊亂組AR基因CAG重復范

10、圍為11-30，平均22.25±3.24，中位數(shù)為22；兩種代謝紊亂組AR基因CAG重復范圍為12-32，平均22.41±3.54，中位數(shù)為22；無代謝紊亂組AR基因CAG重復范圍為8-34，平均22.72±4.11，中位數(shù)為22；四組之間均數(shù)比較差異無顯著性。 (5)按AR基因所含CAG重復數(shù)，將其分為短CAG組(數(shù)量＜22)與長CAG組(數(shù)量≥22)。四組研究對象之間CAG的構(gòu)成比差異無顯著性。長CAG組的體重、BMI、腰圍

11、和臀圍均高于短CAG組。 (6)卡方檢驗表明，CAPN10-SNP43G/A多態(tài)性的基因型頻率在四組間差異無顯著性(P＞0.05)，基因型以GG純合子最多見。四組均以等位基因G為主，等位基因頻率的分布在四組間差異亦無顯著性(P＞0.05)。 (7)多元逐步回歸后，BMI、臀圍、體重、年齡、膽固醇、空腹血糖和高密度脂蛋白與中心性肥胖有關。logistic多元回歸分析：甘油三酯、空腹血糖、腰圍、收縮壓是代謝綜合征的獨立危險因

12、素；CAG重復數(shù)、CAPN10-SNP43G/A基因型等因素與代謝綜合征無關。 結(jié)論: (1)在AR基因(CAG)n正常范圍內(nèi)，CAG重復數(shù)目與AR mRNA和AR蛋白表達水平之間不存在線性負相關，但CAG缺失即CAG0表達水平最高。 (2)長CAG組(數(shù)量≥22)的人群有較高的體重、BMI、腰圍和臀圍。BMI、臀圍、體重、年齡、膽固醇、空腹血糖、高密度脂蛋白與腰圍相關。 (3)CAPN10-SNP43G