Calpain2及自噬相關(guān)基因ATG7的表達(dá)在非酒精性脂肪性肝病中的作用.pdf

1、目的:研究Calpain2及自噬相關(guān)基因7(autophagy related gene7，ATG7)在非酒精性脂肪性肝病中的表達(dá)變化及意義。
　　方法:
　　(1)30只SD雄性大鼠隨機(jī)設(shè)立基礎(chǔ)飼料組(正常對(duì)照組，C組)，高脂飲食組(模型組，F(xiàn)組)，其中C組取8周時(shí)相點(diǎn)，F(xiàn)組應(yīng)用高脂飲食料喂養(yǎng)(基礎(chǔ)飼料87.5％，豬油10％，膽固醇2％，膽鹽0.5％)，建立非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liv

2、er disease,NAFLD)動(dòng)物模型，并按時(shí)相點(diǎn)分為4周、8周、12周及16周組4個(gè)時(shí)相點(diǎn)，每時(shí)相點(diǎn)6只大鼠；(2)動(dòng)態(tài)觀察各組：①血清游離脂肪酸(FFA)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶變化(AST)變化；②通過HE染色光鏡觀察肝臟脂肪變情況；③實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)Calpain2及ATG7mRNA的表達(dá)變化；④Western blot法檢測(cè)Calpain2及ATG7的蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　①NAF

3、LD大鼠模型組各時(shí)相點(diǎn)血清游離脂肪酸(FFA)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平隨高脂飲食喂養(yǎng)時(shí)間延長呈上升趨勢(shì)，均較對(duì)照組有明顯升高，在16周組時(shí)分別為165.95±7.24 U/L、249.52±4.20 U/L、0.83±0.05mmol/L,與對(duì)照組比較均有顯著升高(P＜0.01)。②HE染色提示肝臟脂肪變程度隨高脂飲食喂養(yǎng)時(shí)間的延長而加重：C組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)規(guī)則，無明顯異常；F組肝臟在4周時(shí)為單純

4、性脂肪變階段，NAS積分2分，病理分級(jí)為1度脂肪變，8周時(shí)脂肪變加重，呈2度脂肪變，NAS積分4分，12周時(shí)有炎細(xì)胞浸潤，NAS積分6分，進(jìn)展為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；16周為NASH基礎(chǔ)上伴肝纖維化，NAS積分9分；③real-time PCR檢測(cè)結(jié)果：以正常飲食組為對(duì)照組，肝組織Calpain2 mRNA相對(duì)表達(dá)量在高脂飲食喂養(yǎng)后開始上調(diào)，在16周時(shí)(9.83±0.85，P＜0.01)升高最為明顯；ATG7的mRNA相對(duì)表達(dá)

5、量在4周組(0.82±0.02)即開始下降，在16周組(0.20±0.03)降至最低，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。④Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，F(xiàn)組Calpain2蛋白相對(duì)表達(dá)水平與mRNA表達(dá)水平一致，4周組(2.32±0.45)時(shí)開始上調(diào)，16周組(9.87±1.20，P＜0.01)明顯上升。而ATG7的蛋白相對(duì)表達(dá)水平則隨肝臟脂肪變性的進(jìn)展明顯下降，16周時(shí)降低最為顯著(0.18±0.05