MSP58在人肝癌中的表達研究.pdf

1、肝癌是常見的惡性腫瘤之一，現(xiàn)已成為我國第二位惡性腫瘤致死原因[1]。尋找在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用的分子，進而干預(yù)肝癌的惡性生物學(xué)行為，已經(jīng)成為該領(lǐng)域的研究熱點。我們前期的研究利用我校自主研究發(fā)現(xiàn)的NDRG2抑癌基因為誘餌，采用酵母雙雜交方法，發(fā)現(xiàn)了MSP58基因（58-kDamicrospheruleprotein）[2]，進一步的研究發(fā)現(xiàn)，MSP58在人腦膠質(zhì)瘤中有較高水平的表達，其表達程度與腦膠質(zhì)瘤的病理惡性程度呈正相關(guān)[

2、3]。另有研究表明：MSP58蛋白可影響腫瘤細胞的增殖能力[4]，其表達程度具有明顯的細胞周期相關(guān)的特點；它在細胞中過表達可以增強腫瘤細胞的克隆形成能力，并使細胞呈現(xiàn)非錨著依賴生長的惡性表型，且該蛋白可以與多種在腫瘤的發(fā)生及增殖過程中發(fā)揮重要作用的分子產(chǎn)生相互作用[5]。上述研究表明：MSP58基因是一個對腫瘤增殖有著重要作用的癌基因；對該基因表達的干預(yù)有望成為人工干預(yù)腫瘤發(fā)生發(fā)展的新靶點。目前，圍繞該基因的有關(guān)研究工作正逐步展開，但其

3、在人肝癌細胞中表達方面的研究尚未見報道。本研究利用免疫組化、RT-PCR和Westernblot技術(shù)，分別對HHCC、HepG2肝癌細胞系和不同惡性程度肝癌組織中MSP58的mRNA水平及蛋白表達水平進行了檢測，旨在闡明MSP58在人肝癌細胞中的表達規(guī)律。
　　實驗一:MSP58基因在不同肝癌細胞系中的表達研究
　　目的:探討MSP58在HHCC、HepG2肝癌細胞系中的表達規(guī)律。方法:應(yīng)用HHCC，HepG2兩種肝癌細胞系

4、，采用半定量RT-PCR和Westernblot，探索MSP58基因在不同肝癌細胞系中的表達差異；圖片結(jié)果應(yīng)用KDSID軟件進行灰度掃描分析，統(tǒng)計方法采用方差分析，以P<0.05（顯著差異）定為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:細胞系檢測結(jié)果顯示，在人肝癌細胞系HHCC、HepG2中，MSP58在mRNA及蛋白水平均有表達，其表達量在這兩種細胞系中無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論:MSP58在HHCC和HepG2肝癌細胞系中均有表達；其表達量在這兩種

5、細胞系中無顯著差異。
　　實驗二:MSP58基因在肝細胞癌中的表達與定位研究
　　目的:研究在不同分化程度的肝細胞癌組織中MSP58蛋白的表達情況及其在癌細胞中的定位規(guī)律。方法:本實驗隨機收集了100例已經(jīng)病理確診為肝細胞癌的癌組織標(biāo)本和30例正常肝組織標(biāo)本。以正常肝組織標(biāo)本作為對照組；按WHO的病理分級標(biāo)準(zhǔn)將肝細胞癌組織標(biāo)本分為3組，各組根據(jù)其分化級別分別命名為：高分化組（32例）、中分化組（53例）、低分化組（15例）。

6、所有標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林液固定、石蠟包埋切片，然后進行MSP58蛋白免疫組織化學(xué)染色和隨機圖像采集。圖片結(jié)果采用Imagepro-Plus軟件進行測量分析，對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和q檢驗，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果:100例肝細胞癌組織中有83例MSP58蛋白免疫組化染色陽性，檢出率達83％；對照組30例正常肝組織中有7例MSP58陽性，檢出率23.3％