IFIT4在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的表達(dá)及其在單核細(xì)胞分化中的功能研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)功能紊亂造成多臟器損傷，患者的健康和壽命受到嚴(yán)重威脅。由于發(fā)病機(jī)制不清，尚未有根治性藥物治療。為探尋SLE發(fā)病機(jī)制，我們利用寡核苷酸基因芯片，篩選到一組IFN誘導(dǎo)表達(dá)蛋白(IFN-I induciable protein)在SLE外周血白細(xì)胞高表達(dá)，其中包括一個(gè)表達(dá)和功能未知的新基因：IFIT4(Interferon-induced Drotein with tetratricopeptide r

2、epeats 4)。提示這組基因可能與SLE發(fā)病相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬探討IFIT4的表達(dá)特性和生物學(xué)功能及其在SLE中免疫紊亂致病機(jī)制中的作用。 目的：①探討IFIT4與SLE病情、臨床表現(xiàn)、自身抗體等指標(biāo)的相關(guān)性。②探討IFIT4的組織、細(xì)胞分布、亞細(xì)胞定位及干擾素(IFN)-Q對(duì)其表達(dá)的影響。③探討IFIT4在單核細(xì)胞向樹突細(xì)胞分化過程中的生物學(xué)功能。 方法：①利用半定量qRT-PCR檢測(cè)107例SLE患者和45例正常人

3、外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中IFIT4 mRNA表達(dá)差異，并且與臨床各項(xiàng)檢查指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析；Western-blot檢測(cè)各25例SLE患者和正常人PBMC中IFIT4蛋白的表達(dá)差異；免疫熒光雙染、共聚焦顯微鏡觀察SLE患者腎臟中各免疫細(xì)胞中IFIT4的表達(dá)差異。②利用反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)檢測(cè)IFIT4 mRNA在15種組織及4種免疫細(xì)胞中的表達(dá)；構(gòu)建和轉(zhuǎn)染GFP一IFIT4融合質(zhì)粒入單核細(xì)胞，共聚焦顯微鏡觀察IFT

4、4亞細(xì)胞定位；最后用western-blot、qRT—PCR檢測(cè)工FN—α和CpG—A刺激正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)前后IFIT4、statl等的表達(dá)差異。③將IFIT4融和質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染到單核細(xì)胞系細(xì)胞(THP一1)中使其過表達(dá)，在GM—CSF／IL一4／TNF—α刺激下誘導(dǎo)DC分化的過程中，分別用顯微鏡、FACs、。H摻入試驗(yàn)、ELISA檢測(cè)空質(zhì)粒對(duì)照組和IFIT4融合質(zhì)粒組誘導(dǎo)分化的DC樣細(xì)胞表型的差異。ELISA法檢測(cè)經(jīng)IF

5、IT4過表達(dá)并被誘導(dǎo)分化的細(xì)胞刺激T細(xì)胞分泌IFN—γ和IL一4的水平差異。 結(jié)果：①與正常人相比，SLE患者PBMC中IFIT4mRNA和蛋白質(zhì)明顯高表達(dá)，IFIT4的表達(dá)與自身抗體如抗核抗體(ANA)，抗ds—DNA，抗sM抗體相關(guān)，但與臨床表現(xiàn)，如面部紅斑、潰瘍、腎炎、補(bǔ)體下降不相關(guān)；IFIT4在狼瘡腎組織浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞中高表達(dá)。②IFlT4 mRNA主要表達(dá)在免疫相關(guān)組織(如脾、淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)、骨髓)和肺臟中及在CD

6、l9<'+>，CD8<'+>，CDl4<'+>細(xì)胞；IFIT4蛋白定位于細(xì)胞漿，經(jīng)干擾素刺激后沒有轉(zhuǎn)移到核內(nèi)的運(yùn)動(dòng)；其表達(dá)受IFN—α調(diào)控，CpG—A不直接參與IFIT4表達(dá)調(diào)控。③IFIT4過表達(dá)細(xì)胞組中CD80、CD86、CD40、HLA—DR增高程度和CDl4、CDllc下調(diào)幅度、抗原遞呈能力和分泌IL—12的水平均高于對(duì)照組，提示IFIT4參與促進(jìn)DC分化的功能。誘導(dǎo)的DC樣細(xì)胞刺激T細(xì)胞產(chǎn)生更多的IFN—γ，提示促進(jìn)Thl細(xì)胞