人類博卡病毒-1型啟動(dòng)子分析及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1反式作用的研究.pdf

1、人類博卡病毒-1(Human bocavirus1，HBoV1)歸類于細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒亞科，博卡病毒屬?；蚪M全長約5.5kb，含左端唯一啟動(dòng)子，編碼兩個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NS1(nonstructural protein)和NP1(nuclear phosphoprotein)，兩個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP1(viral structural protein1)與VP2(viral structural protein2)。NP1是博卡病毒的特有蛋白

2、，對(duì)其研究已經(jīng)取得一定的進(jìn)展，如存在一個(gè)非典型的核定位信號(hào)，調(diào)節(jié)炎癥因子的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等等。但作為在病毒感染細(xì)胞后最先被轉(zhuǎn)錄和翻譯且對(duì)其基因組復(fù)制必須的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1，卻研究甚少。
　　本課題對(duì)我們前期研究中分離到的武漢HBoV1病毒株(pWHL-1 NCBI GeneBank: GU139423)的啟動(dòng)子及NS1進(jìn)行了初步研究。將全長252nt的啟動(dòng)子截短突變，運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測各截短突變的表達(dá)活性。結(jié)果顯示，在

3、96-145nt內(nèi)有一些可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)啟動(dòng)子的活性有重要的影響，而146-196nt為啟動(dòng)子的核心區(qū)域。對(duì)96-145nt內(nèi)的部分核心元件進(jìn)行點(diǎn)突變后，發(fā)現(xiàn)CAAT-box的突變會(huì)導(dǎo)致啟動(dòng)子的活性顯著降低，而TATA-box及CREB、CdxA兩個(gè)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的突變對(duì)其活性卻無顯著影響。同樣運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)探究了HBoV1的NS1對(duì)自身啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄因子AP-1、NF-κB、STAT3和GAS啟動(dòng)子的正調(diào)控活性

4、，發(fā)現(xiàn)NS1的274-379aa為反式作用的關(guān)鍵性區(qū)域，AP-1、NF-κB、STAT3啟動(dòng)子受NS1的調(diào)控，對(duì)GAS啟動(dòng)子活性并無顯著影響。并將NS1基因全長及截短克隆到pEGFP-N1載體中，研究其在細(xì)胞內(nèi)的定位，證實(shí)在180-274aa內(nèi)有入核信號(hào)(NuclearImport Signal，NLS)，340-562aa內(nèi)有核輸出信號(hào)(Nuclear Export Signal，NES)。
　　HBoV1啟動(dòng)子的分析、NS1對(duì)