人白血病細胞系KG-1a中腫瘤干細胞樣亞群細胞的鑒定與富集.pdf

1、目的：探討人白血病細胞系KG-1a中是否存在具有腫瘤干細胞樣生物學特性的亞群細胞。 方法：瑞氏染色和吖啶橙染色分別觀察白血病細胞系KG-1a細胞形態(tài)和RNA含量；流式細胞術檢測細胞周期分布；免疫組化和流式細胞術檢測KG-1a細胞CD34抗原的表達；流式細胞術檢測CD34+CD38-亞群細胞；煙酸己可堿Hoechst33342染色后用熒光顯微鏡觀察KG-1a細胞中側(cè)群（side population，SP）樣細胞所占比例。

2、 結果：白血病細胞系KG-1a細胞形態(tài)原始核仁易見；部分細胞RNA含量低，細胞處于G0/G1期的比例占15.5％。絕大多數(shù)細胞的胞漿和胞膜皆表達CD34抗原，KG-1a中CD34+細胞占96.3％，CD34+CD38-亞群細胞占7.02％；SP樣細胞比例為7.60％。 結論：人白血病細胞系KG-1a中存在具有腫瘤干細胞樣生物學特性的亞群細胞。 目的：探討利用細胞周期特異性藥物5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5

3、-FU）從人白血病細胞系KG-1a中富集腫瘤干細胞樣亞群細胞。 方法：體外藥物敏感試驗確定5-FU的最佳作用濃度和作用時間；KG-1a細胞經(jīng)5-FU藥物處理后，流式細胞術檢測存活細胞群中CD34+CD38-亞群細胞比例；吖啶橙染色觀察細胞內(nèi)的核酸組成；RT-PCR半定量檢測細胞內(nèi)三磷酸腺苷結合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2（ATP-binding cassette superfamily G member2，ABCG2）mRNA的表達；

4、煙酸己可堿Hoechst33342染色后用熒光顯微鏡觀察KG-1a細胞中側(cè)群（side population，SP）樣細胞所占比例；半固體培養(yǎng)觀察細胞的集落形成能力。 結果：50μg/ml5-FU作用KG-1a細胞4d后，CD34+CD38-亞群細胞比例提高10倍以上；吖啶橙染色可見大部分細胞核酸以發(fā)出綠色熒光的DNA為主，RNA含量低；此類細胞高表達ABCG2 mRNA水平；SP樣細胞在存活細胞亞群中得到顯著富集；而藥物處理后