JNK及Bim在人紅白血病耐Imatinib細(xì)胞系KR中的作用.pdf

1、腫瘤是威脅人類健康的主要疾病，化學(xué)治療是惡性腫瘤治療主要手段之一。近年來(lái)，隨著新的化療藥物不斷問(wèn)世，臨床腫瘤治療康復(fù)水平有了很大提高。但是也存在許多腫瘤化療效果不理想的問(wèn)題，影響化療療效的一個(gè)主要問(wèn)題就是腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性(MDR)。腫瘤細(xì)胞的MDR是指一種化療藥物作用于腫瘤產(chǎn)生耐藥后，該腫瘤對(duì)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理不同的多種抗腫瘤藥物具有交叉耐藥性的表現(xiàn)，是臨床腫瘤化療失敗最常見和最難克服的問(wèn)題之一，亦是復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的主要原因。腫瘤細(xì)胞的MD

2、R是一個(gè)十分復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，一種化療藥物的耐藥可能涉及多種耐藥基因、蛋白表達(dá)的改變，而一種腫瘤細(xì)胞的耐藥性也可能涉及幾種耐藥機(jī)制的參與。因此，為了成功地克服臨床上腫瘤耐藥，應(yīng)首先確定該腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制，而設(shè)計(jì)合理可行的逆轉(zhuǎn)策略，為腫瘤化療開創(chuàng)新的前景。 體外培養(yǎng)并建立人紅白血病耐Imatinib細(xì)胞系KR可以為進(jìn)一步研究腫瘤細(xì)胞耐藥機(jī)制及細(xì)胞信號(hào)通路在腫瘤耐藥過(guò)程中的作用，為設(shè)計(jì)新的藥物來(lái)防止和克服腫瘤耐藥提供較理想的實(shí)驗(yàn)平

3、臺(tái)。我們選擇K562細(xì)胞，通過(guò)劑量遞增方法，以Imatinib誘導(dǎo)該細(xì)胞成為耐藥細(xì)胞，并對(duì)其耐藥機(jī)制進(jìn)行了初步探討。 目的：研究絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中c-Jun氨基末端激酶(YNK)及其下游促凋亡蛋白Bim在耐伊馬替尼(Imatinib)的人紅白血病K562細(xì)胞系中的作用，并探討逆轉(zhuǎn)Imatinib耐藥的方法。 方法： 1.人紅白血病耐Imatinib細(xì)胞系KR的建立體外采用Imatinib遞增給藥

4、方法誘導(dǎo)人紅白血病細(xì)胞系K562耐藥，經(jīng)8個(gè)月時(shí)間，建立Imatinib耐藥細(xì)胞系KR。流式細(xì)胞分析測(cè)定細(xì)胞周期分布。 2.KR及K562細(xì)胞蛋白表達(dá)改變的檢測(cè)用Western blot方法檢測(cè)KR及K562細(xì)胞中Phospho-JNK和Bim蛋白的表達(dá)。 3.KR及K562細(xì)胞體外藥物敏感性測(cè)定用MTS／PES確定Imatinib和／或JNK特異性抑制劑SP600125對(duì)KR和K562細(xì)胞增殖活性的影響。數(shù)據(jù)采用SPS

5、S13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用多個(gè)樣本均數(shù)間比較的方差分析。 結(jié)果： 1.人紅白血病耐Imatinib細(xì)胞系KR建立及培養(yǎng)經(jīng)體外誘導(dǎo)后，KR細(xì)胞能穩(wěn)定存活于含伊馬替尼2μM的15％新生小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液中。 2.KR及K562細(xì)胞蛋白表達(dá)的改變與K562細(xì)胞相比，KR細(xì)胞中Phospho-JNK表達(dá)水平明顯上調(diào)，而Bim表達(dá)水平則下降；應(yīng)用JNK特異性抑制劑SP600125抑制JNK活性后，Bi

6、m表達(dá)水平則上調(diào)。 3.MTS／PES檢測(cè)結(jié)果25nM SP600125聯(lián)合應(yīng)用2.0μM Imatinib對(duì)KR細(xì)胞的抑制率明顯高于單用2.0μM Imatinib組。 結(jié)論： 1.成功地建立了人紅白血病耐Imatinib細(xì)胞系KR，能穩(wěn)定存活于含伊馬替尼2μM的培養(yǎng)體系中，KR細(xì)胞與K562細(xì)胞相比，能耐受較高濃度的Imatinib： 2.在KR細(xì)胞系中存在JNK通路的激活及促凋亡蛋白Bim表達(dá)的下調(diào)