自噬在三氧化二砷誘導(dǎo)白血病細(xì)胞系HL60細(xì)胞死亡中的作用.pdf

1、目的：研究自噬在三氧化二砷(As203)誘導(dǎo)的HL60細(xì)胞死亡中的作用，初步探討自噬的作用機(jī)制。 方法：用不同濃度的As203處理人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL60細(xì)胞，采用MTT法測(cè)定As203對(duì)HL60細(xì)胞增殖的抑制作用：應(yīng)用MDC熒光染色和透射電鏡觀察給藥后自噬和凋亡的發(fā)生以及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化；檢測(cè)LDH漏出率以觀察用自噬特異性抑制劑3．MA阻斷自噬后As203抑瘤作用的變化；免疫組化、流式細(xì)胞儀和Westemb1ot觀察自

2、噬與凋亡在As203誘導(dǎo)的HL60細(xì)胞死亡中的分子機(jī)制。結(jié)果：As203對(duì)HL60細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，且此作用呈明顯的時(shí)間、劑量依賴(lài)性：MDC熒光染色和透射電鏡結(jié)果均顯示As203給藥后可誘導(dǎo)HL60細(xì)胞發(fā)生自噬：LDH漏出率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在As203給藥前阻斷自噬，As203對(duì)HL60細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用增強(qiáng)，而在其給藥后阻斷自噬則As203對(duì)HL60細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用有所減弱；As203誘導(dǎo)HL60細(xì)胞發(fā)生自噬時(shí)，自噬特異性蛋白

3、LC3被激活；As203誘導(dǎo)的HL60細(xì)胞死亡與溶酶體酶cathepsinB、L及蛋白Bid的活化，細(xì)胞線粒體膜電位的下降和細(xì)胞色素C從線粒體到胞漿的釋放以及caspase-3的激活有關(guān)；在As203給藥前用3．MA預(yù)先阻斷自噬，與As203單獨(dú)給藥組相比，可見(jiàn)cathepinB、L和Bid活化片段的表達(dá)增加，線粒體膜電位下降幅度變大，cyto-c釋放增多，caspase-3也被大量激活；而在As203給藥后加入3一MA阻斷自噬，與As

4、203單獨(dú)給藥組相比，cathepsinB、D和Bid活化片段的表達(dá)有所減少，線粒體膜電位的下降幅度減少，細(xì)胞色素C的釋放和caspase-3的激活也在一定程度上被抑制。 結(jié)論：As203能明顯抑制HL60細(xì)胞的生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)其發(fā)生自噬和凋亡。在As203給藥前期，自噬對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用，可作為一種防御機(jī)制抵御環(huán)境變化對(duì)細(xì)胞造成的損傷，隔離某些凋亡因子，延遲凋亡的發(fā)生：而在As203給藥后期，自噬則作為一種細(xì)胞的死亡程序，通過(guò)激活溶