GRO-α在宮頸腫瘤微環(huán)境中誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞衰老的機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的：已有研究證實(shí)，在腫瘤發(fā)生的微環(huán)境中，間質(zhì)成纖維細(xì)胞的衰老可能促進(jìn)上皮性腫瘤的發(fā)生，但宮頸癌的發(fā)生是否與其組織中間質(zhì)成纖維細(xì)胞的衰老相關(guān)有待深入研究。檢測(cè)宮頸腫瘤微環(huán)境中間質(zhì)成纖維細(xì)胞的GRO-α表達(dá)水平，分析GRO-α誘導(dǎo)宮頸間質(zhì)成纖維細(xì)胞衰老研究的信號(hào)傳導(dǎo)通路，可能為宮頸癌的早期診斷及治療提供指導(dǎo)和幫助。
　　方法：宮頸癌組織和正常宮頸組織H&E染色以及間質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞鑒定;分離純化正常宮頸成纖維細(xì)胞(normal

2、 fibroblasts，NFs)和宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts，CAFs)，用ELISA的方法檢測(cè)NFs和CAFs中GRO-α的表達(dá)水平，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞因子白介素6(IL-6)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的分泌水平;用衰老相關(guān)β-半乳糖甘酶染色(SA-β-gal)、細(xì)胞計(jì)數(shù)和蛋白檢測(cè)法(Western Blot)分別鑒定細(xì)胞衰老、繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和NFs與CAFs中VEGF和p16蛋

3、白表達(dá);用RT-PCR的方法檢測(cè)GRO-α的受體CXCR2的表達(dá)情況;用人重組GRO-α細(xì)胞因子處理正常宮頸成纖維細(xì)胞后，再通過(guò)β-半乳糖苷酶染色法觀察其衰老情況;用蛋白免疫印跡法探討GRO-α對(duì)間質(zhì)成纖維細(xì)胞作用的可能機(jī)理:用CAF-CM(conditioned medium)，CAF-CM+GRO-αAb，或GRO-α分別處理NFs，檢測(cè)細(xì)胞中相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：在宮頸癌相關(guān)間質(zhì)成纖維細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中GRO-

4、α的分泌量較正常宮頸成纖維細(xì)胞中的明顯增多;宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-6和VEGF也比正常宮頸成纖維細(xì)胞要高2倍以上(P＜0.05);宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞中SA-β-gal的活性要比正常宮頸成纖維細(xì)胞高;宮頸正常成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯快于宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)速度;宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞中p16的表達(dá)水平比正常宮頸成纖維細(xì)胞中要高;宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞表面受體CXCR2較正常宮頸成纖維細(xì)胞中明顯增強(qiáng);用人重組GRO-α細(xì)胞