GRO-α在宮頸腫瘤微環(huán)境中誘導(dǎo)間質(zhì)細胞衰老的機制研究.pdf

1、背景與目的：已有研究證實，在腫瘤發(fā)生的微環(huán)境中，間質(zhì)成纖維細胞的衰老可能促進上皮性腫瘤的發(fā)生，但宮頸癌的發(fā)生是否與其組織中間質(zhì)成纖維細胞的衰老相關(guān)有待深入研究。檢測宮頸腫瘤微環(huán)境中間質(zhì)成纖維細胞的GRO-α表達水平，分析GRO-α誘導(dǎo)宮頸間質(zhì)成纖維細胞衰老研究的信號傳導(dǎo)通路，可能為宮頸癌的早期診斷及治療提供指導(dǎo)和幫助。
　　方法：宮頸癌組織和正常宮頸組織H&E染色以及間質(zhì)細胞和上皮細胞鑒定;分離純化正常宮頸成纖維細胞(normal

2、 fibroblasts，NFs)和宮頸癌相關(guān)成纖維細胞(cancer-associated fibroblasts，CAFs)，用ELISA的方法檢測NFs和CAFs中GRO-α的表達水平，同時檢測細胞因子白介素6(IL-6)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的分泌水平;用衰老相關(guān)β-半乳糖甘酶染色(SA-β-gal)、細胞計數(shù)和蛋白檢測法(Western Blot)分別鑒定細胞衰老、繪制細胞生長曲線和NFs與CAFs中VEGF和p16蛋

3、白表達;用RT-PCR的方法檢測GRO-α的受體CXCR2的表達情況;用人重組GRO-α細胞因子處理正常宮頸成纖維細胞后，再通過β-半乳糖苷酶染色法觀察其衰老情況;用蛋白免疫印跡法探討GRO-α對間質(zhì)成纖維細胞作用的可能機理:用CAF-CM(conditioned medium)，CAF-CM+GRO-αAb，或GRO-α分別處理NFs，檢測細胞中相關(guān)信號分子的表達變化。
　　結(jié)果：在宮頸癌相關(guān)間質(zhì)成纖維細胞的條件培養(yǎng)基中GRO-

4、α的分泌量較正常宮頸成纖維細胞中的明顯增多;宮頸癌相關(guān)成纖維細胞分泌的細胞因子IL-6和VEGF也比正常宮頸成纖維細胞要高2倍以上(P＜0.05);宮頸癌相關(guān)成纖維細胞中SA-β-gal的活性要比正常宮頸成纖維細胞高;宮頸正常成纖維細胞生長速度明顯快于宮頸癌相關(guān)成纖維細胞生長速度;宮頸癌相關(guān)成纖維細胞中p16的表達水平比正常宮頸成纖維細胞中要高;宮頸癌相關(guān)成纖維細胞表面受體CXCR2較正常宮頸成纖維細胞中明顯增強;用人重組GRO-α細胞