IL-8在卵巢腫瘤微環(huán)境中促進(jìn)腫瘤的惡性表型及其機(jī)制.pdf

1、目的：檢測卵巢腫瘤微環(huán)境中白介素8的表達(dá)水平，分析IL-8對(duì)間質(zhì)細(xì)胞的作用及可能的信號(hào)通路;通過三維培養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察IL-8對(duì)腫瘤的生長及惡性表型的作用，并探討其可能機(jī)理。
　　方法：1、在卵巢癌組織中用免疫組化的方法檢測間質(zhì)中IL-8的表達(dá)水平;用ELISA的方法檢測NOF和CAOF細(xì)胞中IL-8的表達(dá)水平;用RT-PCR的方法檢測IL-8受體CXCR1/CXCR2的表達(dá)情況。2、用人重組IL-8細(xì)胞因子處理正常成纖維細(xì)胞后，

2、通過β-半乳糖苷酶染色法觀察其衰老情況;用蛋白免疫印跡的方法探討IL-8對(duì)間質(zhì)細(xì)胞作用的可能機(jī)理:分CAF cm(condition medium)組24、48、72小時(shí)，CAFcm+IgG組24、48、72小時(shí)，IL-8組24、48、72小時(shí)。3、在三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中根據(jù)加入培養(yǎng)基的不同分5組:空白對(duì)照組、IL-8處理組、CAOFcm組、CAFcm+IgG IL-8組、Senescence cm，觀察克隆球的數(shù)量、大小和向周圍侵襲的能力。

3、4、用兩株卵巢癌細(xì)胞HEY和SKOV3建立人卵巢癌移植瘤動(dòng)物模型。每個(gè)細(xì)胞系（以HEY為例）分6組:HEY、HEY+NOF組、HEY+NOF(IL-處理)組、HEY+NOF(CAOF條件培養(yǎng)基處理)組、HEY+NOF(CAOF條件培養(yǎng)基加IL-8抗體處理)、HEY+CAOF組，觀察動(dòng)物移植瘤生長情況，繪制腫瘤生長曲線。
　　結(jié)果：1、卵巢癌間質(zhì)組織中IL-8的表達(dá)明顯高于卵巢正常間質(zhì)組織中的表達(dá);在癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中I

4、L-8分泌也較正常成纖維細(xì)胞中的明顯增多，此外，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞表面受體CXCR1/CXCR2的表達(dá)較正常成纖維細(xì)胞中的也明顯增強(qiáng)。2、用人重組IL-8細(xì)胞因子處理正常成纖維細(xì)胞，間質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的衰老跡象;進(jìn)一步的機(jī)理研究顯示:IL-8在腫瘤微環(huán)境中主要是通過主要蛋白p53/pp53/p16、p65/pp65來促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的衰老。3.三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IL-8處理組相較于空白對(duì)照組中形成的克隆球體積更大、數(shù)量更多，且腫瘤細(xì)胞的侵襲

5、性更強(qiáng);在CAOFcm處理組中，形成的克隆球體積最大、數(shù)量最多，且細(xì)胞侵襲力也最明顯;在CAFcm+IgGIL-8組中，形成的克隆球體積較CAOFcm組的明顯縮小，數(shù)量也明顯減少，細(xì)胞侵襲性也明顯減弱，但相較于空白對(duì)照組，形成的克隆數(shù)仍較多，且細(xì)胞侵襲力仍較強(qiáng);Senescence cm組較空白對(duì)照組中形成的克隆球體積明顯增大，數(shù)量明顯增多，但作用效果不如CAOFcm組明顯。4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，腫瘤生長曲線結(jié)果顯示:單純腫瘤細(xì)胞組（作為對(duì)照

6、組）裸鼠體表的腫瘤體積很小，明顯小于其他各組（除了第2組）;第2組中，即腫瘤細(xì)胞+NOF組形成的腫瘤最小;第3組中，即腫瘤細(xì)胞+NOF(IL-8處理后）組腫瘤體積大于對(duì)照組;第4組中，即腫瘤細(xì)胞與NOF(CAOF條件培養(yǎng)基處理后)組形成的腫瘤也較大，明顯大于對(duì)照組;第5組中，NOF(CAOF條件培養(yǎng)基加IL-8抗體處理后)的腫瘤體積小于第4組，但大于空白對(duì)照組;第6組中，即腫瘤細(xì)胞+CAOF組形成的腫瘤最大，與對(duì)照組相比存在明顯差異。<