菊花DgZFP5及bZIP1基因的克隆和功能鑒定.pdf

1、菊花作為世界四大鮮切花之一，除具有世人早已熟知的觀賞價(jià)值、藥用價(jià)值和食用價(jià)值外，菊花還具有相當(dāng)高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在世界各地廣泛栽培。然而，在菊花的實(shí)際生產(chǎn)中，常常受到如干旱、高鹽等不利環(huán)境因子的影響，時(shí)下菊花育種的迫切目的之一就是培育耐逆性強(qiáng)的菊花新品種。
　　無論是在植物生長(zhǎng)發(fā)育還是在脅迫響應(yīng)過程中，C2H2型鋅指蛋白和bZIP類轉(zhuǎn)錄因子都發(fā)揮著極其重要的作用。本實(shí)驗(yàn)以菊花為實(shí)驗(yàn)材料，基于新一代高通量測(cè)序技術(shù)Illumina HiS

2、eq2000對(duì)菊花轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序獲得數(shù)據(jù)庫，從中篩選出具有完整開放閱讀框的基因，利用電子克隆和RT-PCR技術(shù)克隆得到新的C2H2型鋅指蛋白和bZIP類轉(zhuǎn)錄因子，分別命名為DgZFP5和bZIP1。序列分析顯示:DgZFP5的開放閱讀框?yàn)?50bp，編碼149個(gè)氨基酸殘基，基因編碼蛋白質(zhì)分子量為16.7KDa，等電點(diǎn)為9.11，并且該基因編碼的蛋白含有2個(gè)C2H2鋅指域和一個(gè)EAR-box(DLNL);bZIP1的開放閱讀框?yàn)?17bp

3、，編碼138個(gè)氨基酸殘基，基因編碼蛋白質(zhì)分子量為16.3KDa，等電點(diǎn)為9.50。
　　使用DgZFP5基因質(zhì)粒與植物表達(dá)載體pBI121構(gòu)建表達(dá)載體pBI121-DgZFP5，同時(shí)由bZIP1基因質(zhì)粒和植物表達(dá)載體pCAMBIA2300構(gòu)建表達(dá)載體pCAMBIA2300-bZIP1，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草，分別成功獲得DgZFP5和bZIP1轉(zhuǎn)基因煙草植株。表型觀察發(fā)現(xiàn):在正常情況下，野生型和5個(gè)轉(zhuǎn)DgZFP5基因株系在整個(gè)生