Toll樣受體7，9在慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制中作用的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是病毒性肝炎最常見(jiàn)的病原體之一.有些人初次感染HBV后不能徹底清除病毒,成為慢性HBV攜帶者甚至慢性乙型肝炎患者,從而形成肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌的高危人群.HBV持續(xù)感染與宿主的α干擾素(interferon-α,IFN-α)產(chǎn)生水平低、特異性免疫耐受、T細(xì)胞應(yīng)答不足或漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞減少及產(chǎn)生IFN-α功能受損等現(xiàn)象相關(guān),但其確切機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究. Toll樣受體

2、(TLRs)家族是一類(lèi)病原模式識(shí)別受體(Pattem RecognitionReceplors,PRRs),介導(dǎo)識(shí)別病原體的保守分子結(jié)構(gòu),在天然免疫系統(tǒng)中起著非常重要的作用.漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)為外周血中I型干擾素生成細(xì)胞,外周血單個(gè)核細(xì)胞(PeripIleral Blood Mononuclear Cell,PBMC)經(jīng)刺激后產(chǎn)生的IFN-αQ有98﹪以上由其產(chǎn)生.PDC

3、主要通過(guò)TLR7和TLR9感受病毒感染并啟動(dòng)下游免疫反應(yīng),其中TLR9識(shí)別的是細(xì)菌和病毒的DNA分子;而TLR7識(shí)別單鏈RNA等.除此之外,pDC對(duì)T細(xì)胞,B細(xì)胞,NK細(xì)胞,mDC等均有誘導(dǎo)和調(diào)控作用,是連接天然免疫和特異性免疫的橋梁.為了探討TLR7和TLR9在慢性HBV感染病人中的作用,本研究首先分別從轉(zhuǎn)錄和蛋白水平研究了41例慢性HBV感染的不同階段病人及11例健康對(duì)照的外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR7和TLR9改變,探討TLR7和TLR

4、9表達(dá)調(diào)控狀況與慢性HBV感染后不同階段以及原發(fā)性肝癌之間的關(guān)系.實(shí)時(shí)熒光定量PCR先證實(shí)了在患者組,HBV 感染在mRNA水平抑制了TLR7和9的表達(dá),然后免疫蛋白印跡和流式細(xì)胞檢測(cè)獲得定量,結(jié)果表明慢性HBV的感染抑制了慢性乙型肝炎及乙肝相關(guān)的原發(fā)性肝癌患者組外周血單個(gè)核細(xì)胞中TLR7蛋白表達(dá).但TLR9在蛋白水平上卻隨著病程進(jìn)展及原發(fā)性肝癌的發(fā)生呈現(xiàn)上升的趨勢(shì).提示TLR9表達(dá)增加可能與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關(guān).我們選擇慢性乙型肝炎病

5、人與健康對(duì)照進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎病人pDC細(xì)胞比例和數(shù)量,TLR7和TLR9的表達(dá)較正常人下降,細(xì)胞免疫組化也找到HBV表面抗原及核心抗原在慢性乙型肝炎病人pDC細(xì)胞中有表達(dá).經(jīng)相關(guān)性分析,pDC細(xì)胞比例和數(shù)量下降,以及TLRs的表達(dá)均與血漿HBV DNA的載量相關(guān).對(duì)TLR7和TLR9介導(dǎo)的pDC細(xì)胞制造IFN-α的功能通過(guò)ELISA方法進(jìn)行評(píng)估后發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎患者組的pDC喪失了經(jīng)TLRs對(duì)其相應(yīng)配體發(fā)生反應(yīng)的能力.這些