仿刺參(Apostichopus japonicas)腸道再生期巨大芽孢桿菌對生長、免疫、消化及腸道菌群的作用.pdf

1、本論文采用傳統(tǒng)平板涂布計數(shù)法結(jié)合HiSeq2000高通量16S rDNA序列分析技術(shù)研究在仿刺參腸道再生過程中巨大芽孢桿菌H1對其腸道菌群的影響。同時通過分析仿刺參腸道相關(guān)免疫酶活（酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶）和消化酶活（蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶）、生長指標(biāo)（體重和特定生長率）等，結(jié)合燦爛弧菌人工拮抗試驗(yàn)，進(jìn)一步研究巨大芽孢桿菌H1對腸道再生期仿刺參生長、免疫和消化的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明巨大芽孢桿菌H1能夠顯著減少仿刺參腸道的弧

2、菌數(shù)量;降低因病原弧菌引起的仿刺參排臟率;對仿刺參幼參具有很好的保護(hù)作用，其排臟保護(hù)率可達(dá)92.31％;同時提高仿刺參的特定生長率3.00±0.34倍。以上研究為巨大芽孢桿菌H1在仿刺參保苗養(yǎng)殖中的廣泛應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。所獲得的主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用HiSeq2000高通量及傳統(tǒng)平板涂布計數(shù)法發(fā)現(xiàn):仿刺參幼參正常腸道細(xì)菌種類主要分布于變形菌門、浮霉菌門、放線菌門、厚壁菌門、疣微菌門、綠彎菌門、酸桿菌門等，其中變形菌門所

3、占比例最大。腸道菌群是波動的，但是均以γ-變形菌綱為優(yōu)勢菌群，且其所占比例有不斷增加的趨勢。仿刺參正常腸道細(xì)菌的種類比再生期的更為豐富。
　　2.由于發(fā)生排臟，再生期仿刺參腸道除變形菌門和擬桿菌門，其他種類細(xì)菌所占比重較小，γ-變形菌綱在再生的不同階段其所占的比例均在70％以上。巨大芽孢桿菌H1影響再生腸道菌群的結(jié)構(gòu)，實(shí)驗(yàn)組A(加巨大芽孢桿菌H1)的芽孢桿菌數(shù)量一直顯著高于空白對照組C和實(shí)驗(yàn)組B（不加巨大芽孢桿菌H1）（P＜0.0

4、5），在再生后期（第25天）實(shí)驗(yàn)組A、實(shí)驗(yàn)組B及空白對照組C可培養(yǎng)的弧菌數(shù)量分別占可培養(yǎng)的總異養(yǎng)菌數(shù)79.15％、91.52％、71.17％。說明H1在仿刺參再生腸道內(nèi)能有效定植(可達(dá)107CFU/g)，并顯著抑制弧菌的生長（P＜0.05）。
　　3.分析了仿刺參腸道相關(guān)免疫酶活（酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶）和消化酶活（蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶），發(fā)現(xiàn)腸道再生初期的酸性磷酸酶ACP和堿性磷酸酶AKP水平均顯著低于正常腸道

5、，伴隨著腸道再生，ACP和AKP水平逐漸提高，趨于正常水平。巨大芽孢桿菌H1在再生初期對仿刺參腸道ACP和AKP具有一定抑制作用，但在再生后期具有顯著促進(jìn)ACP和AKP水平的作用（P＜0.05）。不同于ACP和AKP，再生期腸道SOD水平顯著高于正常腸道，可能是再生初期仿刺參的一種自我保護(hù)。之后SOD水平隨著腸道再生不斷降低，接近于正常腸道的SOD活性。同樣，巨大芽孢桿菌H1在再生初期對仿刺參腸道SOD具有一定抑制作用。巨大芽孢桿菌H1

6、對再生期仿刺參腸道蛋白酶和淀粉酶具有顯著促進(jìn)作用(P＜0.05)，但是只在再生初期顯著提高仿刺參腸道脂肪酶活性（P＜0.05）。
　　4.處于腸道再生初期的仿刺參幼參其體質(zhì)量顯著下降，呈負(fù)生長狀態(tài)。但在第10天，隨著發(fā)現(xiàn)糞便的產(chǎn)生，表明幼參已初具消化能力且體重開始緩慢的上升，并在第12天呈正生長。水體中添加105 CFU/ml的巨大芽孢桿菌H1可顯著促進(jìn)仿刺參腸道再生期仿刺參特定生長率并增重(P＜0.05)。說明巨大芽孢桿菌H1可