射血分?jǐn)?shù)正常的心力衰竭患者臨床特點(diǎn)及相關(guān)基因的初步篩查分析.pdf

1、第一部分:射血分?jǐn)?shù)正常的心力衰竭患者的臨床特點(diǎn)及相關(guān)危險(xiǎn)因素分析
　　背景:心力衰竭是21世紀(jì)危害人類(lèi)健康的重要心血管疾病之一,它是大多數(shù)心血管疾病發(fā)展的終末階段。一直以來(lái),人們對(duì)心力衰竭研究的注意力多集中于射血分?jǐn)?shù)減低的心力衰竭(heart failure with reduced ejection fraction, HFREF)上,然而近年來(lái)的臨床研究發(fā)現(xiàn),射血分?jǐn)?shù)正常的心力衰竭(heart failure with nor

2、mal ejection fraction, HFNEF)的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),但是由于臨床上對(duì) HFNEF的發(fā)病機(jī)制乃至診斷和治療等仍存在諸多懸而未決的問(wèn)題,致使該類(lèi)患者的生存率未見(jiàn)明顯改善,因此HFNEF已成為近些年心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
　　目的:分析HFNEF患者的臨床特點(diǎn)及相關(guān)危險(xiǎn)因素。
　　方法:本研究為單中心研究,共收集我院心內(nèi)科2010年1月-2013年5月住院患者960例(≥40歲),其中心力衰竭患者71

3、8例,對(duì)照者242例,心力衰竭患者又被分為HFNEF組245例,HFREF組473例,比較各組患者的實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)、基礎(chǔ)疾病、藥物治療史以及超聲指標(biāo)等。
　　結(jié)果:與HFREF組相比,HFNEF組多為高齡、女性,其血鈉偏高、血紅蛋白偏低,多合并高血壓病(收縮壓升高更明顯)、心房顫動(dòng)和腦梗死,而患冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(Coronary heart disease, CHD)、心肌梗死的比例偏低,有血管緊張素II受體拮抗劑(ang

4、iotensin II receptor blockers, ARB)、鈣通道阻滯劑(calcium channel blockers, CCB)用藥史的患者比例偏高,有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitor, ACEI)、利尿劑、地高辛、硝酸酯類(lèi)用藥史的比例偏低(P<0.05),HFNEF組左心室呈對(duì)稱(chēng)性肥厚,左心室內(nèi)徑和容積正常。與對(duì)照組比較,HFNEF組N-末端腦鈉肽

5、前體(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)顯著升高(P<0.01),左心房?jī)?nèi)徑擴(kuò)大,左室質(zhì)量指數(shù)(left ventricular mass index, LVMI)升高(P<0.01)。女性和心房顫動(dòng)為HFNEF住院患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。
　　第二部分:射血分?jǐn)?shù)正常的心力衰竭相關(guān)基因的初步篩查分析
　　背景:近些年,HFNEF已經(jīng)成為心血管領(lǐng)

6、域的研究熱點(diǎn),雖然國(guó)內(nèi)外學(xué)者在其發(fā)病機(jī)制等方面取得了一些進(jìn)展,但仍有許多問(wèn)題有待研究,特別是HFNEF相關(guān)基因及其多態(tài)性的研究仍少見(jiàn)報(bào)道。第二代測(cè)序技術(shù)的迅猛發(fā)展,為人們對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)、預(yù)防、診斷和治療提供了新的思路。基于全基因組測(cè)序、全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome Wide Association Studies, GWAS)、連鎖分析等研究基礎(chǔ),大量與重要性狀相關(guān)的候選基因、候選區(qū)域或候選位點(diǎn)被定位在染色體上,人們只需對(duì)基因組中感興趣

7、的候選區(qū)域進(jìn)行測(cè)序就可滿(mǎn)足研究需求,即目標(biāo)區(qū)域測(cè)序。這樣不僅可以大幅度縮小測(cè)序區(qū)域,而且還極大地降低了成本,非常適合大樣本量研究。通過(guò)目標(biāo)區(qū)域測(cè)序,可以找到候選區(qū)域或候選基因內(nèi)的易感位點(diǎn),也可以對(duì)候選位點(diǎn)或候選基因進(jìn)行驗(yàn)證。
　　目的:對(duì)HFNEF的易感位點(diǎn)進(jìn)行篩查,初步發(fā)現(xiàn)具有較顯著差異的基因位點(diǎn)。
　　方法:入選我院心內(nèi)科住院患者180例(≥40歲),分為HFNEF、HFREF和正常對(duì)照3組,每組各60例,三組患者的性別

8、、年齡相匹配,收集患者的臨床信息并采集靜脈血提取DNA。利用靶向捕獲系統(tǒng)結(jié)合高通量測(cè)序?qū)δ繕?biāo)區(qū)域易感位點(diǎn)進(jìn)行初步篩查。首先用NimbleGen公司的在線(xiàn)設(shè)計(jì)軟件NimbleDesign設(shè)計(jì)探針,并訂制NimbleGen序列捕獲芯片,將探針與樣品基因組DNA在序列捕獲芯片上進(jìn)行雜交,將目標(biāo)基因組區(qū)域的DNA片段進(jìn)行富集后再利用第二代測(cè)序技術(shù)進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果與參考序列進(jìn)行比對(duì)后,利用生物信息分析和多組比較的方法發(fā)現(xiàn)差異的單核苷酸多態(tài)性(

9、Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs)。
　　結(jié)果:去除質(zhì)量不合格的樣品,本研究實(shí)際測(cè)序樣品總數(shù)是167個(gè),其中HFNEF組57個(gè),HFREF組54個(gè),正常對(duì)照組56個(gè)。將這些樣品的測(cè)序結(jié)果與human genome(hg19)參考序列比對(duì)后,將在目標(biāo)區(qū)域發(fā)現(xiàn)的SNPs結(jié)果按上述分組進(jìn)行兩兩比較分析,共發(fā)現(xiàn)11個(gè)與HFNEF有較顯著相關(guān)的SNPs(P<0.001),這些位點(diǎn)位于蛋白質(zhì)編碼區(qū)、非

10、編碼區(qū)、5’非翻譯區(qū)(5’ untranslated regions, UTR5’)和3’非翻譯區(qū)(3’ untranslated regions, UTR3’)等區(qū)域。
　　結(jié)論:HFNEF是復(fù)雜的臨床綜合征,約1/3的住院心力衰竭患者為HFNEF者,女性和心房顫動(dòng)是此類(lèi)人群的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;此研究初步篩查出與HFNEF有較顯著相關(guān)的SNPs位于蛋白質(zhì)編碼區(qū)、非編碼區(qū)、UTR5’和UTR3’等區(qū)域,很有可能影響基因的功能,并進(jìn)一步