miRNA-182對(duì)成年大鼠藥物性聾損傷的保護(hù)及機(jī)制.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一硫酸卡那霉素聯(lián)合呋塞米注射液快速致聾動(dòng)物模型的建立
　　目的：
　　通過建立快速藥物性聾動(dòng)物模型,觀察硫酸卡那霉素與呋塞米注射液聯(lián)合用藥對(duì)正常SD(Sprague-Dawley)大鼠的聽力學(xué)及形態(tài)學(xué)的影響。
　　方法：
　　32只雌性大鼠腹腔注射硫酸卡那霉素(500mg/Kg),30分鐘后再經(jīng)腹腔注射呋塞米注射液(0.2ml/Kg),正常對(duì)照組經(jīng)腹腔注射給予等量生理鹽水。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于給藥后1天、7天、

2、14天行腦干誘發(fā)電位(auditory brainstem response,ABR)檢測(cè),并別行基底膜鋪片、免疫熒光染色,掃描電鏡觀察。
　　結(jié)果：
　　聯(lián)合注射呋塞米與硫酸卡那霉素后,藥物致聾組大鼠ABR閾值明顯提高,對(duì)照組ABR均正常;鋪片觀察發(fā)現(xiàn)外毛細(xì)胞有部分缺失,其中以底轉(zhuǎn)缺失較為明顯,內(nèi)毛細(xì)胞損傷程度較輕。
　　結(jié)論：
　　該藥物濃度及給藥方法引起的形態(tài)學(xué)改變,以底轉(zhuǎn)外毛細(xì)胞部分缺失為主,但底轉(zhuǎn)并不會(huì)

3、完全缺失。與單純給予硫酸卡那霉素或慶大霉素給藥造聾相比,可明顯縮短給藥致聾的時(shí)間,且更安全、有效,為耳蝸毛細(xì)胞損傷的保護(hù)等實(shí)驗(yàn)研究提供了一種簡(jiǎn)單、快速而有效的大鼠耳聾的動(dòng)物模型。
　　實(shí)驗(yàn)二miRNA-182圓窗龕給藥的觀察研究
　　目的：
　　了解miRNA-182及其稀釋劑RNase-free water經(jīng)圓窗給藥在耳蝸內(nèi)的分布及其對(duì)毛細(xì)胞的影響。
　　方法：
　　24只雌性SD大鼠分為三組,每組8只。

4、即:A組:miRNA-182(帶cy3熒光標(biāo)記)組、B組:單純RNase-free water組、C組:單純手術(shù)組。每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雙耳均行手術(shù)。術(shù)中每組給予對(duì)應(yīng)處理,給藥劑量及方式均相同。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于手術(shù)后12小時(shí)、24小時(shí)及48小時(shí)完善ABR檢測(cè),術(shù)后24小時(shí)行掃描電鏡檢查,術(shù)后48小時(shí)行基底膜鋪片,并分別于術(shù)后24、48小時(shí)各留取miRNA-182組一只耳蝸行冰凍切片。
　　結(jié)果：
　　單因素方差分析可知,三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給

5、藥致聾后各時(shí)間點(diǎn)ABR的反應(yīng)閾值及各組手術(shù)前后ABR閾移均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各組基底膜鋪片及掃描電鏡均形態(tài)正常,無缺失。根據(jù)耳蝸冰凍切片可知,miRNA-182組術(shù)后24小時(shí)的miRNA-182在耳蝸血管紋、corti器上分布較術(shù)后48小時(shí)更為顯著。
　　結(jié)論：
　　經(jīng)圓窗龕給予miRNA-182于術(shù)后24小時(shí)在耳蝸血管紋及 corti器上分布較48小時(shí)更為顯著,且對(duì)大鼠聽力學(xué)及形態(tài)學(xué)無損傷作用。
　　實(shí)驗(yàn)

6、三miRNA-182對(duì)大鼠藥物性聾損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制
　　目的：
　　研究miRNA-182對(duì)大鼠藥物性聾損傷的保護(hù)作用。
　　方法：
　　24只雌性SD大鼠隨機(jī)分為三組,每組8只。即:A組:miRNA-182組、B組:溶媒劑(RNase-free water)組、C組:空白對(duì)照組。A、B兩組經(jīng)圓窗分別給予miRNA-182及RNase-free water,術(shù)后24小時(shí),以上三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均完善腦干誘發(fā)電位(

7、ABR)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)束后當(dāng)天將以上三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按公斤體重先給予硫酸卡那霉素500mg/Kg,腹腔注射一次,30-45分鐘后給予呋塞米注射液0.2ml/Kg,腹腔注射一次。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于給藥致聾后1天、7天、14天行ABR檢測(cè),并于第14天最后一次ABR檢測(cè)結(jié)束后當(dāng)天各組均隨機(jī)各抽取1只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,行掃描電鏡檢查、全耳蝸基底膜鋪片、顳骨冰凍切片及免疫熒光染色,另取2只行毛細(xì)胞缺失率計(jì)數(shù)。
　　結(jié)果：
　　ABR結(jié)果顯示,空白

8、對(duì)照組及溶媒劑組在給藥致聾后的各時(shí)間點(diǎn)的閾值比較無顯著性差異(P>0.05);空白對(duì)照組與溶媒劑組兩者比較,各時(shí)間點(diǎn)也無顯著性差異(P>0.05);miRNA-182組與空白對(duì)照組、miRNA-182組與溶媒劑組兩者之間比較各時(shí)間點(diǎn)均有顯著性差異(P<0.05);miRNA-182組給藥致聾后的各時(shí)間點(diǎn)的閾值比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　同時(shí),miRNA-182組與空白對(duì)照組、miRNA-182組與溶媒劑組相比,前者與后

9、者給藥致聾前后各時(shí)間點(diǎn)的ABR閾移有顯著性差異(P<0.05);溶媒劑組與空白對(duì)照組相比,兩組給藥致聾前后各時(shí)間點(diǎn)的ABR閾移無顯著性差異(P>0.05)。
　　各組掃描電鏡及基底膜鋪片可見,空白對(duì)照組與溶媒組各排外毛細(xì)胞纖毛排列紊亂交錯(cuò),倒伏明顯,各排均有大量外毛細(xì)胞缺失,排列稀疏;miRNA-182組外毛細(xì)胞排列紊亂,毛細(xì)胞有部分缺失,但缺失較其他兩組明顯較少。miRNA-182組基底膜外毛細(xì)胞總?cè)笔蕿?1.57％;溶媒劑組

10、外毛細(xì)胞總?cè)笔蕿?0.47%;空白對(duì)照組外毛細(xì)胞總?cè)笔蕿?7.06%。
　　cleaved caspase-3免疫熒光染色可見,1.miRNA-182組中cleaved caspase-3的表達(dá)較正常大鼠增加。2.溶媒劑組及對(duì)照組(單純給予硫酸卡那霉素+呋塞米注射液)中cleaved caspase-3的表達(dá)量較miRNA-182組及正常大鼠明顯增強(qiáng)。3.溶媒劑組與對(duì)照組(單純給予硫酸卡那霉素+呋塞米注射液)兩者之間cleav