母系遺傳藥物性聾與非綜合征性聾的分子遺傳機制與功能研究.pdf

1、對一個氨基糖甙類藥物性聾和非綜合征聾的母系遺傳性中國大家系進行遺傳學(xué)分析：在沒有接受氨基糖甙類抗生素時，一些母系遺傳的成員表現(xiàn)為程度不等的遲發(fā)/進行性聽力下降，平均發(fā)病年齡自55歲(第2代)逐漸提前到10歲(第5代)。氨基糖甙類藥物可導(dǎo)致母系成員聽力下降，而且患者接受藥物的年齡似乎與聽力下降程度有關(guān)。對該家系成員進行線粒體DNA測序發(fā)現(xiàn)：高度保守的12SrRNA基因中1494位點C突變?yōu)門，并且為同質(zhì)性突變，該C1494T突變可以使12

2、SrRNA形成新的U1494-1555A堿基配對，與耳聾相關(guān)的A1555G突變所造成的C1494-1555G堿基配對結(jié)構(gòu)相類似。當(dāng)培養(yǎng)液中含有氨基糖甙類抗生素時，有C1494T突變的4名聽力下降者和2名聽力正常成員的淋巴細胞系的細胞倍增時間較對照組淋巴細胞顯著延長，并且這些淋巴細胞系的細胞氧消耗率顯著降低。隨后，將從該家系成員的淋巴細胞中的線粒體分別轉(zhuǎn)移到線粒體DNA缺乏的p0206細胞中，分形成各自的融合細胞系，然后對耳聾相關(guān)的線粒體

3、12SrRNAC1494T突變的生化特性進行研究。其中有來自2名聽力正常者的6個融合細胞系、來自聽力下降者的9個融合細胞系，均有線粒體DNAC1494T突變，它們的線粒體蛋白質(zhì)合成進行同位素標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)其線粒體蛋白質(zhì)合成速率分別比對照組4名成員的12個融合細胞系下降了38％和43％。顯然，這些缺陷可以導(dǎo)致攜帶C1494T突變的融合細胞(不論來自聽力正常者還是來自聽力下降者)的細胞總體呼吸率下降或蘋果酸/谷氨酸、琥珀酸/三磷酸甘油或TMPD

4、/抗壞血酸所始動的呼吸率下降。而且，和對照組的細胞系相比，有C1494T突變的聽力正常者或聽力下降者的融合細胞系在含有/不含有高濃度巴龍霉素的DMEM培養(yǎng)液中，細胞倍增時間比值呈非常顯著的一致性增加。 通過此課題研究，觀察到的這些資料直接證明了線粒體DNAC1494T突變與氨基糖甙類藥物性聾和非綜合征性聾有關(guān)。我們的試驗結(jié)果也首次以直接的生化學(xué)證據(jù)證明：線粒體12SrRNA的A位點是氨基糖甙類藥物性聾的主要作用位點；另外，我們的