595nm脈沖染料激光對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞結(jié)締組織生長(zhǎng)因子表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　研究不同劑量脈寬脈沖染料激光(Pulsed Dye Laser，595nm)對(duì)體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective Tissue Growth Factor，CTGF)表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響。初步探究脈沖染料激光治療瘢痕疙瘩的作用機(jī)理。
　　方法：
　　以不同能量密度(6J、8J、10J)和脈寬(1.5ms、3ms、10ms)的脈沖染料激光照射體外培養(yǎng)至2～4代的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞

2、，照射后繼續(xù)培養(yǎng)，設(shè)置6個(gè)時(shí)間點(diǎn)（照光前72小時(shí)、24小時(shí)、12小時(shí)，照光后12小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)），通過Realtime-PCR和Westernblott測(cè)定CTGFmRNA及蛋白的表達(dá)，通過CC-K8法檢測(cè)成纖維細(xì)胞的增殖變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期變化及凋亡率，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組（未照光組）作為比較。
　　結(jié)果：
　　RT-PCR法顯示:隨著能量密度的增加，激光照射后不同能量組之間的RQ值與對(duì)照組之間比

3、較有顯著性差異，激光照射后，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CTGFmRNA的表達(dá)與空白對(duì)照組相比，均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且激光照射后隨著時(shí)間的增加，相同參數(shù)組各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)抑制越明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，不同能量密度組之間比較，隨著激光能量密度的增加，CTGFmRNA的表達(dá)抑制越明顯，也具有顯著性差異(P＜0.05)，而相同能量密度，不同脈寬組之間，CTGFmRNA的表達(dá)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); W

4、esternblott法顯示:與對(duì)照組相比，激光照射后各能量密度組均可以明顯抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CTGF蛋白的表達(dá)，有顯著性差異(P＜0.05)，且激光照射后隨著時(shí)間的增加，相同參數(shù)組各時(shí)間點(diǎn)的蛋白表達(dá)抑制越明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，不同能量密度組之間亦有顯著性差異(P＜0.05)，能量密度越高，抑制越明顯，而相同的能量密度，不同的脈寬組之間，無顯著性差異(P＞0.05);CC-K8法顯示，隨著能量密度的增加，激光照射后

5、不同能量組之間的OA值與對(duì)照組之間比較有顯著性差異(P＜0.05)，均顯著降低，不同能量組之間比較也具有顯著性差異(t=0.00，P＜0.05)，能量密度越高，OA值表達(dá)越低，且激光照射后隨著時(shí)間的增加，相同參數(shù)組各時(shí)間點(diǎn)的OA值表達(dá)抑制越明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而相同能量密度，不同脈寬組之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);流式細(xì)胞術(shù)顯示，在激光照射之前，不同時(shí)間點(diǎn)各能量組與對(duì)照組相比，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期比較

6、無顯著性差異(P＞0.05)，激光照射后，隨著激光能量密度和時(shí)間的增加，處于G1期的細(xì)胞較對(duì)照組明顯增多，而S期的細(xì)胞明顯減少，細(xì)胞的凋亡率也明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05)，在不同能量密度組之間比較時(shí)亦有顯著性差異(P＜0.05)，能量密度越高，處于G1期細(xì)胞越多，S期的細(xì)胞越少，凋亡率越高，而在各相同能量組，不同脈寬組之間比較時(shí)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　在一定的能量范圍內(nèi)，脈沖染料激光