NF-κB對D-gal誘導(dǎo)擬老化大鼠聽覺系統(tǒng)脫髓鞘調(diào)控的研究.pdf

1、第一部分D-gal誘導(dǎo)擬老化大鼠聽覺系統(tǒng)脫髓鞘的探討與研究
　　目的：探索D-gal誘導(dǎo)擬老化大鼠聽覺系統(tǒng)脫髓鞘情況。
　　方法：購自武漢大學(xué)動物中心200只3周齡的SD大鼠，22～24℃恒溫動物房中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組各100只。實(shí)驗(yàn)組予D-gal(150mg/kg/d)頸部皮下注射，對照組注射同等劑量生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組與對照造模時間為8周。造模完成后讓大鼠適應(yīng)性的喂養(yǎng)1周。隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)組和對照組各10只大

2、鼠，鹽酸氯胺酮（30mg/kg）和氯丙嗪（15mg/kg）腹腔注射麻醉測量ABR。分別測量左右耳的聽閾。然后給予4KdB,8KdB,12KdB,20KdB,24KdB,32KdB，40KdB的click刺激并記錄。4％的水合氯醛（0.35mg/kg）腹腔注射麻醉后，處死取下耳蝸組織，對髓鞘和神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行染色，在熒光顯微鏡下觀察比對實(shí)驗(yàn)組和對照組同一部位髓鞘和神經(jīng)元數(shù)量和密度情況。
　　結(jié)果：ABR檢測顯示：實(shí)驗(yàn)組大鼠的click

3、閾值稍高于對照組，分頻顯示實(shí)驗(yàn)組高頻聽力損傷明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。打藥后1周，耳蝸切片染色示，在底回處，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)元密度和數(shù)量較對照組少，而髓鞘則變化不明顯。中回和頂回切片染色中無論是神經(jīng)元細(xì)胞和髓鞘在數(shù)量和密度上均無差異。
　　結(jié)論：實(shí)驗(yàn)組ABR閾值較對照組稍高，聽力損傷測試有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。切片染色耳蝸底回的髓鞘和神經(jīng)元細(xì)胞的密度和數(shù)量減少，而在中回和頂回處，神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞和髓鞘在密度和數(shù)量上均無差異，推測老齡化大鼠是從耳蝸底回開始

4、病變，經(jīng)中回向頂回發(fā)展。需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量證實(shí)該結(jié)論，同時也需要向后推遲實(shí)驗(yàn)時間節(jié)點(diǎn)，繼續(xù)行連續(xù)切片染色，證實(shí)病變按照底回和中回病變的時間順序。
　　第二部分NF-κB對D-gal誘導(dǎo)擬老化大鼠聽覺中樞脫髓鞘調(diào)控的研究
　　目的：NF-κB對D-gal誘導(dǎo)擬老化大鼠聽覺中樞脫髓鞘調(diào)控的研究
　　方法：隨機(jī)取打完藥后1周的實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠各6。本部分實(shí)驗(yàn)的另外一個實(shí)驗(yàn)時間節(jié)點(diǎn)是13周大鼠。4%的水合氯醛（0.35mg

5、/kg）腹腔注射麻醉大鼠。處死取大鼠聽皮層，海馬，下丘組織，進(jìn)行NF-κB的western blot分析，用Image J或photo shop軟件計(jì)算實(shí)驗(yàn)組與對照組的NF-κB條帶的灰度值，計(jì)算與內(nèi)參的比值比，制成灰度直方圖，用spss17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：打完藥1周后的實(shí)驗(yàn)組和對照組的NF-κB的western blot的灰度比值比，經(jīng)spss17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，聽皮層、海馬、下丘的P值均大于0.05，無統(tǒng)計(jì)