新型肝炎相關病毒(HGV和TTV)的實驗研究.pdf

1、該文研究分別對HGV和TTV進行了一些基礎研究,該文分二部分:第一部分庚型肝炎病毒(HGV)的研究.該教研室曾經構建了HGV全基因組cDNA克隆pHGVqz,并在GenBank注冊(注冊號為AFO81782).為了進一步闡明HGV的致病性和復制部位,該研究在獲得HGV全基因組cDNA克隆的基礎上,體外轉錄獲得了全長HGVRNA基因組,研究了該RNA轉錄體對恒河猴的致病性,并初步建立了HGV感染的細胞模型,主要工作如下:1、HGVRNA轉

2、錄體感染恒河猴的研究;以HGV全長cDNA基因組克隆為模板,體外轉錄制備了全長HGVRNA轉錄體,肝內注射感染BK15和BY1兩只恒河猴,取其感染后陽性血清分別感染BS1和BM1恒河猴,然后取BM1陽性血清再感染BB1恒河猴.結論:恒河猴對HGV敏感,可作為實驗動物模型.HGV可在可猴中感染并輕度的肝炎樣病為.HGV可以在恒河猴肝組織復制,亦可在心臟和脾臟中復制.2、HGV細胞模型的初步建立;利用Lipofectamin將HGVRNA轉

3、錄體轉染,HepG2細胞,RT-PCR檢測培養(yǎng)細胞和上清中HGV正、負鏈RNA,在轉染后24H便可在培養(yǎng)上清中檢測到HGV負鏈RNA.結論:HepG2細胞不僅對HGV易感,而且可以支持HGV的復制增殖.3、HGVNS5基因在昆蟲細胞中的表達與鑒定.以pHGV-Iwh6T重組質粒為模板,PCR擴增HGVNS5部分基因片段,BamHI和KpnI酶切后定向克隆至pPROEXHTa載體進行序列測定.結論:在昆蟲細胞中成功地表達了具有免疫原性的H

4、GVNS5重組蛋白,可用于HGV感染的檢測,也為研究其結構與功能提供物質材料.第二部分輸血傳播性病毒(TTV)的研究.為探蛤TTV的分布和基因組結構,該研究檢測了TTV在上海地區(qū)獻血員、血透病人和肝病患者中的感染情況,并擴增克隆了TTV亞基因組.1、高危人群中TTV的感染率;設計TTV保守區(qū)域的特異性引物,PCR檢測ALT正常獻血員、血透病人和肝病患者中TTV的感染率.結論:上海地區(qū)ALT正常獻血員、血透病人和肝病患者中均存在TTV高感