BMSC向神經(jīng)細胞分化誘導(dǎo)后上清液對MCI大鼠治療作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 探討3代、4代、5代大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞誘導(dǎo)后12h上清液對認知功能障礙大鼠的治療作用。
　　 方法：
　　 1、大鼠BMSC的分離、培養(yǎng)和鑒定BMSC采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法，用流式細胞儀對選取的第3代BMSC，按105/mL水平分別置于5個檢測管后加入小鼠抗大鼠CD29抗體、CD44抗體、CD34抗體以及用于對照的IgGI和空白對照進行檢測。2、細胞爬片和誘導(dǎo)與鑒定分別取第3、4、5代BM

2、SC進行預(yù)誘導(dǎo)，具體方法為：六孔板中加入含1mmol/LβME和20％胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)液。24h后吸棄預(yù)誘導(dǎo)液。加入bFGF20ng/mL和10％胎牛血清。后行免疫細胞化學(xué)鑒定。3、實驗動物的選擇與處理3月齡大鼠十只為正常組，Morris水迷宮行隱蔽平臺獲得實驗確立認知功能障礙大鼠標準：平均潛伏期較正常組延長20％以上者定義為認知功能障礙大鼠。15-22月齡大鼠Morris水迷宮行隱蔽平臺獲得實驗篩選認知功能障礙大鼠40只，隨

3、機分生理鹽水對照組、3代、4代、5代干細胞傳代誘導(dǎo)后12小時上清液治療組并行行為學(xué)檢測，后分別海馬注射生理鹽水、三代、四代、五代干細胞傳代誘導(dǎo)后12小時上清液3μ(1)。注射上清后4周4組大鼠進再次行行為學(xué)檢測。4、免疫組織化學(xué)染色測定CDK5表達程度。
　　 結(jié)果：
　　 1、成功分離培養(yǎng)BMSC，傳至3代后，細胞呈旋渦狀排列的均一梭形，流式細胞儀檢測符合MCS表型特征：檢測CD29表達率為(99.7％)、CD44表達

4、率為(99.8％)、CD34表達率為(2.3％)。2、誘導(dǎo)后細胞形態(tài)變化與免疫化學(xué)鑒定加入預(yù)誘導(dǎo)液24h后可以觀察到一部分細胞胞膜胞質(zhì)漸進性向胞核方向集中、收縮，移入bFGF后上述變化更加明顯，可見突起形成。各組細胞均有部分細胞NSE陽性，表現(xiàn)為胞漿呈黃棕色，陽性率為42.50±6.40，GFAP染色后各誘導(dǎo)組出現(xiàn)極少量陽性細胞。3、水迷宮實驗對注射前后定位巡航實驗潛伏期差值行統(tǒng)計學(xué)分析，除三代組與五代組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其它任

5、何兩組間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，三代與五代上清液較四代效果明顯。4、各組腦組織邊緣系統(tǒng)CDK5表達情況Kruskal-Wallis檢驗可認為四組CDK5表達情況總體分布不同或不全相同(X2=32.046，P＜0.001)，進一步應(yīng)用Wilcoxon秩和檢驗分別對四組行組間兩兩比較，除三代組與五代組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，余各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，三代（平均秩和=5.50）與五代（平均秩和=5.50）上清液組較四代(平均秩