脂肪間充質(zhì)干細胞對急性骨髓型放射病治療的實驗研究.pdf

1、目前,隨著國內(nèi)外對急性放射病(acute radiation sickness,ARS)發(fā)病機制、實驗治療等基礎(chǔ)性研究的逐步深入,輸血、細胞因子治療和干細胞移植等技術(shù)也已經(jīng)在臨床應(yīng)用上逐步推廣開來。但是,這些治療方法在不同程度上都具有一定的局限性,這就在一定程度上影響治療的效果,也就迫使人們尋找新的行之有效的治療方法。自Zuk等人在2001年從人脂肪組織中成功分離出脂肪間充質(zhì)干細胞(human adipose derived stem

2、cells,hADSCs),繼而發(fā)現(xiàn)ADSCs因其具有多項分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等多項生物學(xué)特點,并且其來源廣泛、取材方便而日益受到人們的關(guān)注。目前有研究發(fā)現(xiàn)作為一種重要的間充質(zhì)干細胞,脂肪間充質(zhì)干細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow stem cells,BMSCs)具有相似的生物學(xué)特性和多分化潛能[3],能否將其替代BMSCs用于治療ARS,成為我們感興趣的研究內(nèi)容。我們從小鼠脂肪間充質(zhì)干細

3、胞的分離培養(yǎng)、骨髓型ARS模型的制備和脂肪間充質(zhì)干細胞移植治療三個方面進行了研究,為今后脂肪間充質(zhì)干細胞在急性放射病治療方面提供基礎(chǔ)的實驗材料。
　　第一部分，工作是對小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)。我們改進了脂肪間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)方法。選用3周齡左右的昆明種小鼠,無菌條件下取出附睪部位脂肪,采用胰蛋白酶和Ⅰ型膠原酶同時消化小鼠的附睪脂肪的方法獲得了大量的細胞,采用多次反復(fù)貼壁培養(yǎng)的方法純化細胞,并在培養(yǎng)基中加入了堿性成纖維細

4、胞生長因子(basic fibrolast growth factor recombinant,bFGF)促進細胞生長,從而建立了穩(wěn)定的體外ADSCs培養(yǎng)和擴增體系。通過觀察描述了ADSCs原代及多次傳代后的形態(tài)特征,同時繪制了第三代ADSCs的生長曲線,觀察其增殖特性。實驗結(jié)果表明:脂肪間充質(zhì)干細胞取材及其分離方法較為簡單,細胞較易貼壁,多為呈梭形和三角形生長,細胞生長活躍,7天左右可達到80%-90%融合,此時觀察細胞多呈漩渦狀。多

5、次傳代培養(yǎng)后,細胞形態(tài)逐漸趨于一致,多呈梭形。10ng/mL的bFGF促進細胞貼壁生長,縮短了細胞培養(yǎng)時間,使細胞7天左右即可傳一代。細胞可長時間反復(fù)傳代培養(yǎng),其生長曲線為S形。
　　第二部分，工作是制備骨髓型ARS模型。對三周齡左右的雄性SD大鼠進行總劑量分別為4Gy和7Gy的一次性全身照射,在照射后第0、2、4、9、16、29天尾靜脈采血檢測大鼠外周血象的變化,并在細胞移植后第5、12、34天各組分別處死5只大鼠,腹主動脈采血

6、檢測血清生化指標變化。實驗結(jié)果表明:大鼠受到輻照后外周血中白細胞、紅細胞和血小板數(shù)量明顯減少,且與受照的劑量呈正相關(guān);
　　第三部分，工作是ADSCs移植治療。選用培養(yǎng)至第三代的ADSCs用生理鹽水重懸至濃度為1×106/mL,在照射后6h對大鼠進行尾靜脈輸注,為期一周。在照射后第0、2、4、9、16、29天尾靜脈采血檢測大鼠外周血象的變化,并在細胞移植后第5、12、34天各組分別處死5只大鼠,腹主動脈采血檢測血清生化指標變化。實