以水泡性口炎病毒VSV為載體的結(jié)核疫苗VSV-846的免疫作用及機(jī)制探討.pdf

1、目前，結(jié)核病依然是世界范圍內(nèi)的嚴(yán)重疾病。我國(guó)的結(jié)核病疫情告急，根據(jù)2010年第五次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)年發(fā)病人數(shù)約為130萬(wàn)，約占全球發(fā)病的14.3％。結(jié)核病疫情之所以未能獲得有效的控制，其主要原因是預(yù)防性結(jié)核病疫苗的開(kāi)發(fā)緩慢以及進(jìn)展不足。世界上目前唯一可用的結(jié)核疫苗BCG，因其只能保護(hù)幼兒及嬰兒，不能在成人身上起到良好的保護(hù)效果，急需對(duì)BCG進(jìn)行改進(jìn)或研制新的疫苗?？紤]到結(jié)核疫苗的現(xiàn)狀，新型疫苗應(yīng)該具有能夠在體內(nèi)建立

2、長(zhǎng)效免疫應(yīng)答的特點(diǎn)。水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus，VSV)因其本身具備的大量?jī)?yōu)點(diǎn)且在普通人群內(nèi)存在抗VSV抗體少等特點(diǎn)，使其成為一個(gè)理想的病毒疫苗載體。本文通過(guò)分子生物學(xué)的方法將含有結(jié)核桿菌三抗原融合基因p846及單個(gè)抗原Rv3615c，Mtb10.4，Rv2660c克隆至VSV-XN2載體，通過(guò)VSV病毒包裝系統(tǒng)，將其包裝在VSV病毒中，同時(shí)我們也構(gòu)建了三個(gè)單個(gè)抗原及融合抗原TFP846的原核表

3、達(dá)載體，并體外純化了相應(yīng)蛋白。將成功構(gòu)建的重組VSV病毒融合抗原疫苗和單抗原疫苗以滴鼻的方式對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，以BCG組作為對(duì)照組。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程在攻毒后持續(xù)24周，檢測(cè)相應(yīng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答，評(píng)估其在抗結(jié)核感染中的作用，并探討該保護(hù)作用的機(jī)制機(jī)理。
　　統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明重組病毒VSV-846疫苗誘生的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答、及保護(hù)作用和傳統(tǒng)疫相對(duì)單個(gè)抗原疫苗有著極其顯著的差異，在感染階段的后期（24周）與BCG免疫組相比也具有差異性，并且可以檢

4、測(cè)到記憶性T細(xì)胞的產(chǎn)生。通過(guò)Brdu，LDH，細(xì)胞染色等一系列實(shí)驗(yàn)表明，三抗原融合疫苗，彼此相互促進(jìn)，使得整個(gè)疫苗較單獨(dú)抗原所制備的疫苗具有明顯的優(yōu)勢(shì)，能夠激發(fā)更強(qiáng)勁的T細(xì)胞應(yīng)答。并且我們也探究了VSV-846是否能夠作為一個(gè)BCG的booster來(lái)促進(jìn)其保護(hù)效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在攻毒后的第24周，經(jīng)過(guò)VSV-846加強(qiáng)免疫組的細(xì)菌載量明顯低于BCG組（CFU減少了1.10 log10，P＜0.01），說(shuō)明此方案是可行的。綜上，我們構(gòu)建