類胰蛋白酶是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的候選自身抗原.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病之一，雖然表現(xiàn)為全身系統(tǒng)性炎癥，但關(guān)節(jié)滑膜是RA的主要病變起始部位，關(guān)節(jié)滑膜局部存在各種炎性細胞浸潤，高度增生的滑膜細胞進而導(dǎo)致了關(guān)節(jié)骨和軟骨的侵蝕性破壞是RA發(fā)病的基本的病理特征[1]。正常的滑膜是由襯里層和襯里下層組成。然而，在RA病人中，CD4+T細胞，B細胞以及巨噬細胞侵襲了滑膜造成了襯里層高度增生以及襯里下層的大量炎性細胞浸潤，隨后的免疫反應(yīng)如炎癥介質(zhì)以及降解酶的分泌驅(qū)使局部軟骨和骨破壞。

2、
　　類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種多病因的疾病，RA確切的病理機制尚沒發(fā)現(xiàn)，以往研究認為RA是由基因遺傳、環(huán)境壓力（例如吸煙）以及感染微生物等三方面協(xié)同作用而導(dǎo)致的疾病[2]。但自身抗原刺激機體產(chǎn)生自身抗體從而導(dǎo)致機體調(diào)節(jié)功能紊亂在RA疾病發(fā)生過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[6]。有研究認為由RA-相關(guān)的HLA-DR分子遞呈的自身抗原活化了抗原特異的免疫細胞啟動了滑膜炎癥。當(dāng)前，誘導(dǎo)RA自身免疫反應(yīng)的特異的自身抗原仍然不清楚。但是以往研究也發(fā)現(xiàn)了大

3、量的自身抗原，主要有以下三類，一是包括蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、人軟骨細胞糖蛋白-39(HCgp-39)等關(guān)節(jié)來源的;二是包括EBV反式作用因子、hsp60、大腸桿菌dnaJ等與人具有高度同源性的微生物抗原;三是包括瓜氨酸化修飾的filaggrin和免疫球蛋白G等轉(zhuǎn)錄后修飾抗原[7-9]。另外研究發(fā)現(xiàn)親和純化的抗瓜氨酸化的抗體可以識別表達在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)炎關(guān)節(jié)上的抗原[18]但是目前發(fā)現(xiàn)的這些自身抗原尚未發(fā)現(xiàn)有明確的RA疾病相關(guān)性，例如Ⅱ型膠

4、原，雖然有些RA患者血清中存在Ⅱ型膠原抗體，但是存在的Ⅱ型膠原的自身抗體與RA疾病的嚴重程度無關(guān)[19]，因此尋找新的RA疾病特異性的相關(guān)的自身抗原，深入探討RA疾病的分子功能為進一步闡釋RA病理機制奠定基礎(chǔ)，并能為發(fā)展RA臨床診斷和治療提供新的分子靶點。
　　近些年，蛋白組學(xué)理論和技術(shù)上都有很大的進展，血清蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)作為蛋白組學(xué)的一個分支，是近些年來發(fā)展起來篩選自身抗原的一種技術(shù)，它是首先用二維電泳技術(shù)得到正常組織蛋白質(zhì)的表

5、達譜，然后通過免疫印跡技術(shù)找到與病人血清反應(yīng)的蛋白點來進一步研究蛋白質(zhì)與疾病的關(guān)系。因此，我們擬采用血清蛋白組學(xué)技術(shù)尋找RA病人的自身抗原。
　　在本研究中我們首先采用血清蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從RA滑膜組織中篩選出只與RA血清反應(yīng)的蛋白點，然后選取這些蛋白點進行MODI-TOF質(zhì)譜測序;再次我們通過免疫熒光、ELLISA法進一步鑒定選取的蛋白點;最后我們通過分析臨床相關(guān)診斷指標(biāo)與候選抗原之間的相關(guān)性來了解它對臨床的診斷和預(yù)測意義。

6、>　　研究結(jié)果顯示:我們應(yīng)用二維電泳和MODI-TOF質(zhì)譜測序技術(shù)從RA病人的滑膜組織篩選出類胰蛋白酶可能是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的候選自身抗原。我們在RA病人的滑膜組織和血清中都檢測到高水平的類胰蛋白酶以及相應(yīng)的自身抗體。進一步，激光共聚焦顯示RA病人滑膜組織中類胰蛋白酶與其IgG存在共定位，重要的是類胰蛋白酶水平與RA疾病的臨床指標(biāo)如類風(fēng)濕因子、28關(guān)節(jié)評分以及抗環(huán)狀瓜氨酸化的肽有明確的相關(guān)性。我們的結(jié)果表明類胰蛋白酶不僅參與RA疾病的發(fā)生而