宰殺肉雞中肺炎克雷伯菌耐藥基因的檢測和傳播分析.pdf

1、抗生素被認為是二十一世紀最偉大的醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)，對細菌、病毒、寄生蟲等具有抑制和殺滅作用。在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中，它可以防治動物疫病、促進畜禽生長。然而大量使用甚至濫用抗生素，會使動物腸道微生物的生存環(huán)境遭到破壞，導(dǎo)致動物機體抵御外界的能力下降，造成疾病繼發(fā)頻發(fā)。養(yǎng)殖產(chǎn)品的抗生素殘留，將直接影響到食品安全，通過從各條食物鏈源源不斷侵入人體，誘導(dǎo)人類出現(xiàn)原發(fā)耐藥性，威脅整個人類的健康。
　　近年來，越來越多的多重耐藥肺炎克雷伯菌隨著抗生素尤其是由

2、β-內(nèi)酰胺類和喹諾酮類等廣譜抗生素的大量使用而出現(xiàn)。肺炎克雷伯菌是典型的條件致病菌，可經(jīng)過人或動物的呼吸道進入肺內(nèi)引發(fā)病理性突變，其耐藥機制主要是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶、喹諾酮類等耐藥基因。在分子水平上檢測耐藥基因型并對耐藥基因的傳播進行相關(guān)研究，以便采取科學(xué)有效的防控措施顯得尤為重要。
　　目前，對肺炎克雷伯菌耐藥性的研究多以醫(yī)院臨床分離菌株為主，畜牧業(yè)養(yǎng)殖中產(chǎn)生耐藥性菌株的研究較少。本文從山東地區(qū)某肉禽養(yǎng)殖廠的種雞、商品雞的身體表面

3、以及屠宰場的污水中采集樣品，分離純化出75株肺炎克雷伯菌作為實驗菌株，瓊脂紙片藥敏試驗顯示肺炎克雷伯菌對臨床常用的頭孢菌素類氨芐兩林(AMP)的耐藥率已經(jīng)達到了100％，對頭孢他啶(CAZ)、卡那霉素（KAN）、氯霉素(CHL)、環(huán)丙沙星(CIP)也具有很強耐藥性，耐藥率在80％以上。以75株肺炎克雷伯菌DNA為模板進行PCR擴增檢測，共檢出產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因菌株72株，其中有66株blaSHV呈陽性，55株blaTEM呈陽性，有6

4、0株blaCTX-M呈陽性;對blaSHV和blaCTX-M陽性菌株進行基因分型檢測，以SHV-11、SHV-1型和CTX-M-1為主;此外還檢測了細菌質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因，發(fā)現(xiàn)有68株耐藥基因陽性菌株，其中有4株qnrA呈陽性，56株qnrB呈陽性，23株qnrS里陽性，檢出qepA為陽性的菌株共有2株，aac(6')-Ib-cr的陽性菌株共31株，共有66株菌株同時攜帶β-內(nèi)酰胺酶與喹諾酮類耐藥基因。
　　根據(jù)整合子基因

5、序列intI1、intI2和intI3設(shè)計引物，對75株肺炎克雷伯菌進行整合子檢測，結(jié)果顯示有70株Ⅰ型整合子檢測呈陽性，有9株含有Ⅱ型整合子，沒有發(fā)現(xiàn)Ⅲ型整合子菌株。檢測中共發(fā)現(xiàn)3種基因盒陣列，分別為dfrA17-aadA5、dfrA12-orfF-aadA2和dfrA1-sat2-aadA1，這其中出現(xiàn)頻率最大的基因盒是dfrA12-orfF-aadA2，它的大小為1989bp，共出現(xiàn)19次。
　　本文通過對肺炎克雷伯菌耐藥性