阿魏酸鈉通過RhoA-Rho-kinase信號通路降低肝硬化大鼠門脈壓力.pdf

1、目的：門脈高壓食管胃底靜脈曲張出血是肝硬化的主要并發(fā)癥之一，降低門脈壓力是防治肝硬化門脈高壓病人曲張靜脈出血的主要目標。研究證實，阿魏酸鈉可以顯著降低肝硬化病人門脈壓力,但其具體機制不明。有學者已經(jīng)證實RhoA/Rho-kinase信號通路參與了肝硬化門脈高壓的形成，該信號通路活化需要烯化物GGPP，其前體是膽固醇合成過程中的中間產(chǎn)物法尼基蛋白，而阿魏酸鈉可以抑制膽固醇的合成。因此推測阿魏酸鈉可能通過抑制法尼基蛋白，降低RhoA/Rho

2、-kinase信號通路活性。本課題旨在研究阿魏酸鈉降低肝硬化門脈壓力的分子機制。
　　方法：建立膽管結(jié)扎的大鼠肝硬化模型，實驗動物被分為SHAM+NS、BDL+NS及BDL+SF三組，運用原位肝灌注技術(shù)研究甲氧明及阿魏酸鈉治療對膽管結(jié)扎肝硬化大鼠門脈高壓肝內(nèi)阻力的影響；顯微鏡下觀察大鼠肝臟HE染色組織學變化、透射電鏡觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)改變，以評估阿魏酸鈉對各組大鼠肝纖維化程度的影響；用RT-PCR及Western blot檢測各組大

3、鼠肝內(nèi)RhoA、Rho-kinase、eNOS mRNA和蛋白水平的變化；用Pull-Down Assay檢測阿魏酸鈉及GGPP對HSC RhoA活性的影響；用膠原晶格收縮法檢測阿魏酸鈉及GGPP對HSC收縮能力的影響。
　　結(jié)果：阿魏酸鈉能降低膽管結(jié)扎肝硬化大鼠肝內(nèi)阻力（BDL+SF組14.56±0.29vs. BDL+NS組17.64±2.35，p＜0.05）。阿魏酸鈉能抑制甲氧明對膽管結(jié)扎肝硬化大鼠肝內(nèi)阻力的升高作用（BDL

4、+SF組15.12±0.82 vs.BDL+NS組17.63±0.94，p ＜0.05）。病理觀察結(jié)果顯示，阿魏酸鈉治療后膽管結(jié)扎大鼠肝臟纖維化程度及肝細胞破壞程度減輕。RT-PCR檢測結(jié)果顯示，與膽管結(jié)扎肝硬化大鼠相比，阿魏酸鈉處理后Rho-kinase mRNA水平降低(BDL+SF組1.11±0.08 vs.BDL+NS組3.93±0.09，p<0.05)，而eNOS mRNA水平升高(BDL+SF組2.00±0.08

5、vs.BDL+NS組1.00±0.09，p<0.05)。Western blot檢測結(jié)果顯示，在膽管結(jié)扎肝硬化大鼠中阿魏酸鈉處理后Rho-kinase及其下游基因p-moesin蛋白水平降低，而eNOS及其下游基因p-VASP蛋白水平升高；阿魏酸鈉能抑制HSC中活性RhoA表達但不影響其總RhoA表達，而加入GGPP后能逆轉(zhuǎn)阿魏酸鈉對活性RhoA的抑制作用。阿魏酸鈉能抑制HSC收縮，且這種抑制作用隨著阿魏酸鈉濃度增加而更加明顯，而直接加